Dados do Trabalho

Título

Análise de mapa de restrição enzimática com sequências de MPI para PCR-RFLP na diferenciação de espécies de Leishmania sp. agentes de leishmaniose tegumentar na Amazônia brasileira

Introdução

Métodos moleculares como a PCR-RFLP têm-se mostrados eficazes para o diagnóstico da LTA.

Objetivo(s)

O objetivo deste estudo foi selecionar e analisar enzimas de restrição utilizando o primer MPI de 589 pb para separação das espécies descritas na região norte do país (L. amazonensis, L. braziliensis, L. guyanensis, L. lainsoni, L. lindenbergi, L. naiffi, L. shawi e L. utingensis) para uso em PCR-RFLP.

Material e Métodos

A confecção do mapa de restrição foi realizada pelo software BioEdit 7.2.5 utilizando a sequência de Mannose Phosphate Isomerase (MPI) de 589 pares de base, sendo elas: 155675727, JQ181713.1, JQ181760.1, JQ181799.1, JQ181799.1, JQ181801.1, JQ181800.1 e JQ181761.1, depositadas no GenBank do National Center for Biotechnology Information (NCBI). No BioEdit a ferramenta BLAST foi utilizada para comparação da qualidade entre as sequências de MPI e para observar possíveis mutações (Gaps) utilizou-se o alinhamento com ClustalW Multiple Alignment. Em seguida, com as opções: “sequence”, “nucleic acid” e “restriction map” foi gerado um mapa de restrição para cada espécie estudada. Nas opções de criação, foram utilizadas todas as enzimas disponibilizadas pelo Software, os dados obtidos foram transferidos para planilha do Excel para análise.

Resultados e Conclusão

Neste estudo foram analisadas 110 enzimas de restrição, as quais as mais efetivas para diferenciação foram: BceAI, Hpy8I e MboII. A enzima BceAl gerou fragmentos para L. amazonensis (31/100/162pb), L. braziliensis (31/100/162pb), L. guyanensis (31/162pb), L. lainsoni (31/100/162pb), L. lindenbergi (31/100/162pb), L. naiffi (31/162pb), L. shawi (31/100/162pb) e L. utingensis (31/100/162pb), a enzima Hpy8I, fragmentos para L. amazonensis (454pb), L. braziliensis (258/524pb), L. guyanensis (258/310/524/559pb), L. lainsoni (258/524/559pb), L. lindenbergi (258/559pb), L. naiffi (258/524/559pb), L. shawi (258/310/524/559pb) e L. utingensis (258/524/559pb), e a enzima MboII fragmentos para L. amazonensis (16/76/139pb), L. braziliensis (76/139/491/524pb), L. guyanensis (76/139/491/524pb), L. lainsoni (76/139/479/491/524pb), L. lindenbergi (76/139/479/491/524pb), L. naiffi (76/139/524pb), L. shawi (76/139/491/524pb) e L. utingensis (76/139/491/524pb). Desta forma, o mapa de restrição analisado sugere que o gene alvo de MPI e a combinação das 3 (três) enzimas de restrição: BceAI, Hpy8I e MboII possibilitam o processo de diferenciação das espécies de Leishmania descritas na região norte do país.

Palavras-chave

Leishmania, PCR-RFLP, Bioinformática