Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DIFERENCIAL DO GENE ANKLE2 EM Aedes aegypti

Introdução

O Aedes aegypti é o principal mosquito vetor de arbovírus de grande impacto na Saúde Pública por causar doenças como a dengue e Zika. O arbovírus Zika (ZIKV), responsável por um surto epidêmico que atingiu milhões de pessoas em 2015, obteve destaque pelas complicações neurológicas evidenciadas em fetos de mulheres grávidas acometidas por esta infecção. O gene ANKLE2 (Ankyrin Repeat and LEM Domain Containing 2) tem sido associado com doenças como a microcefalia em humanos e com alterações neurais em Drosophila melanogaster. Nesta espécie, o ZIKV foi capaz de causar severos danos nas células neurais e o seu silenciamento foi letal para o inseto. Em Ae. aegypti, o papel de ortólogo do ANKLE2 ainda não foi estudado e nem associado à impactos causados pela infecção do inseto pelo ZIKV.

Objetivo(s)

Com o objetivo de investigar inicialmente o papel deste gene no mosquito Ae. aegypti, neste trabalho avaliamos de forma exploratória o perfil de expressão do gene ANKLE2 nos diferentes tecidos e estágios de desenvolvimento do ciclo biológico.

Material e Métodos

Foram avaliadas amostras de ovo, larvas (L1-L4), pupas, fêmeas e machos adultos, diferentes tecidos específicos (cabeça, asas, patas, glândula salivar, intestino e túbulos de malpighi). Adicionalmente, investigamos a expressão do gene em fêmeas adultas infectadas e não infectadas com ZIKV. Foram feitas RT-qPCRs em triplicatas biológicas, utilizando o Kit QuantiTect® SYBR Green RT-PCR®, segundo as recomendações do fabricante. O gene RPS17 (Proteína Ribossomal S17) foi usado como gene de referência e a expressão relativa do mRNA foi calculada pelo método 2-ΔΔCT. As diferenças estatisticamente significativas foram determinadas pelo teste ANOVA one way usando o programa GraphPad Prism 8.

Resultados e Conclusão

Os resultados revelaram que o gene ANKLE2 é expresso em todos estágios de desenvolvimento do mosquito, com aumento na expressão diferencial significativa nos estágios larval L3 e L4, variando entre 5 a 20x. Nos tecidos avaliados, foi observado uma superexpressão de ANKLE2 nas amostras de patas e asas, com aumento na expressão de 4 a 10x. Não foi observada diferença significativa na expressão do gene ANKLE2 entre o grupo de fêmeas infectadas com o ZIKV e o grupo de fêmeas não infectadas. Os achados obtidos neste trabalho são inéditos e sugerem que este gene, expresso constitutivamente em Ae. aegypti, pode desempenhar um papel biológico importante, porém, mais estudos são necessários para a sua caracterização no vetor.

Palavras-chave

Aedes aegypti, ANKLE2, expressão gênica, RT-qPCR