Dados do Trabalho

Título

Mapeamento de variações intrapopulacionais nas atividades digestivas em Aedes aegypti

Introdução

A digestão de insetos é um alvo estratégico para o desenvolvimento de novas ferramentas de controle. Assim, o estudo de enzimas digestivas dos insetos alvo é necessário para descoberta e teste de novos inibidores. Contudo, a variação nas atividades enzimáticas em populações de insetos da mesma espécie pode ser um fator de resistência. A caracterização das atividades enzimáticas em larvas de linhagens endogâmicas recombinantes (LERs) de Aedes aegypti pode ajudar a compreender essa variação e ajudar a mapear os respectivos genes codificantes dessas enzimas. Com isso pretendemos elucidar mecanismos moleculares da digestão e desvendar novos alvos para controle dessa importante espécie de inseto vetor.

Objetivo(s)

Caracterizar a variação intrapopulacional das atividades enzimáticas em larvas da linhagem Rockfeller.

Material e Métodos

Insetos da linhagem Rockfeller foram cedidas pelo LAFICAVE/IOC. Ovos foram eclodidos em água destilada (26 ± 1ºC, fotoperíodo 12:12) e as larvas alimentadas com TetraMin®. Larvas de quarto instar foram anestesiadas em gelo e dissecadas em intestino, cabeça e resto do corpo, que foram homogeneizados em PBS e usados para ensaios de tripsina e beta-glicosidase, com Z-Phe-Arg-MCA e Metilumbeliferil-beta-glicosídeo como substratos, respectivamente.

Resultados e Conclusão

As atividades de tripsina e beta-glicosidase foram ensaiadas individualmente em 70 insetos, nos compartimentos cabeça, intestino e resto do corpo. O intestino apresentou a maior média e dispersão das atividades, enquanto na cabeça e resto do corpo, as atividades se concentraram próximo de zero. Histogramas da distribuição de frequência resultaram em uma boa representação da alta variabilidade intrapopulacional das atividades, que apresentaram distribuição normal ou não - normal, dependendo do substrato e do compartimento.
A abordagem experimental mostrou-se válida para Rockfeller e será mantida para novas enzimas e para LERs de Aedes aegypti. Com isso, as variações de atividade enzimáticas em diferentes populações isogênicas de insetos poderão ser compreendidas.

Palavras-chave

Digestão; Atividades enzimáticas; Linhagens endogâmicas recombinantes; Aedes aegypti; Tripsina; Beta-glicosidase;