Dados do Trabalho

Título

Proteínas quiméricas como novos antígenos para diagnóstico sorológico da doença de Chagas.

Introdução

A doença de Chagas (DCh) é uma doença negligenciada e endêmica causada pelo Trypanosoma cruzi. Segundo a OMS e a DNDi, seis a sete milhões de pessoas estão afetadas, 75 milhões estão em risco de contrair a DCh, que causa em média14.000 mortes/ano. Apenas 10% dos portadores são diagnosticados e menos de 1% é tratado. Os extratos antigênicos no sorodiagnóstico interferem com a especificidade e um único antígeno recombinante pode não alcançar alta sensibilidade, dada a diversidade antigênica das linhagens de T. cruzi. Por sua vez, o uso de proteínas recombinantes quiméricas pode melhorar essa importante ferramenta já que o sorodiagnóstico é essencial entre as estratégias de controle e prevenção.

Objetivo(s)

Selecionar sequências proteicas, expressá-las em Escherichia coli e avaliar proteínas quiméricas como antígenos para sorodiagnóstico da DCh.

Material e Métodos

Análises de bioinformática foram realizadas com sequências de proteínas de T. cruzi testadas como antígenos únicos para identificar sequências de epítopos lineares de células B. As sequências obtidas foram combinadas em genes sintéticos contendo caudas de histidinas, que foram inseridos no vetor pET-24a(+). Proteínas quiméricas expressas por E. coli transformadas foram purificadas por cromatografia de afinidade e utilizadas como antígenos em ELISA. Condições iniciais foram definidas (concentração de proteína e título de soro, com pools DCh positivo e negativo) e testadas com soros individuais positivos (n=133) e negativos (n=114) para determinação da sensibilidade e especificidade. Também foram testadas 8 amostras de pacientes com diagnóstico de malária, 8 com fator reumatoide, 15 com toxoplasmose e 10 com leishmaniose visceral (LVH).

Resultados e Conclusão

Três proteínas quiméricas, QTc1 (28,27 kDa); QTc2 (26,73 kDa) e QTc3 (30,8 kDa), com pontos isoelétricos 6,53; 9,38 e 5,18, foram obtidas na fração solúvel do extrato bacteriano. Sensibilidade obtida no ELISA foi QTc1: 94% (IC95% 88-97), QTc2: 95% (IC95% 90-98) e QTc3: 92% (IC95% 87-96), e especificidade 97% (IC95% 92-99) para QTc1 e QTc2 e 98% (IC95% 94-100) para QTc3. Apenas amostras de LVH apresentaram reatividade, sendo 3 para QTc1 e 2 para QTc2. A padronização inicial demonstrou que as três proteínas constituem antígenos promissores a serem utilizados na otimização de testes de diagnóstico para a DCh. Diferentes condições serão avaliadas para validação do ELISA, assim como para a prototipagem e avaliação no desenvolvimento de um teste rápido.

Palavras-chave

Sorodiagnóstico, Doença de Chagas, antígeno quimérico