Dados do Trabalho

Título

Investigação da dinâmica de interação e internalização do vírus Zika em células de inseto

Introdução

Os estudos voltados para entender a biologia da infecção causada pelo Zika vírus (ZIKV) em diferentes tecidos e espécies de mosquitos ainda são escassos. Para infectar uma célula hospedeira e iniciar a sua replicação, o vírus precisa ser internalizado no compartimento intracelular. O processo consiste em uma série de eventos dinâmicos, fortemente coordenados, incluindo, entre outros, a ligação do vírus às células, o tráfico intracelular e a entrega da informação genética do vírus.

Objetivo(s)

Investigar de forma comparativa a infecção do ZIKV em duas linhagens celulares de inseto com perfis distintos de permissibilidade à progressão do ciclo de infecção viral, a suscetível C6/36 (de Aedes albopictus) e a não suscetível Sf9 (de Spodoptera frugiperda).

Material e Métodos

A dinâmica de interação e internalização do ZIKV foi investigada através do monitoramento da cinética de infecção por RT-qPCR. Para isso, os estoques virais foram produzidos em células Vero-E6 e posteriormente passado em célula C6/36 (sétima passagem), em seguida, os ensaios de infecção foram conduzidos nos quais as culturas celulares foram expostas ao ZIKV BRPE243/2015 usando multiplicidade de infecção (MOI) de 1 e avaliadas em diferentes momentos do ciclo viral por meio de RT-qPCR. Para monitorar a entrada do vírus em compartimentos intracelulares, bem como investigar alterações ultraestruturais induzidas pelo vírus, às células desafiadas à infecção viral foram preparadas para microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET).

Resultados e Conclusão

As análises de cinética de interação e internalização viral nas células C636 e Sf9 evidenciaram que o ciclo de replicação viral após a infecção do ZIKV em Sf9 não progride, contrastando com a linhagem C636 cujo número de cópias de RNA viral aumenta significativamente em 48hpi (Cq de 24) e para Sf9 (Cq de 28) sem progressão de sinal de infecção independente do time point. Entretanto, através de microscopia MET e MEV foi demonstrado pela primeira vez alterações induzidas pelo ZIKV na linhagem Sf9. Foram detectadas alterações ultraestruturais mediante à exposição da célula ao vírus como desorganização de membrana de retículo endoplasmático formando estruturas semelhantes a autofagossomos nas duas linhagens celulares, assim como a formação de corpos multivesiculares. Os conhecimentos gerados contribuirão de forma significativa no entendimento da biologia da infecção do ZIKV em seus hospedeiros invertebrados.

Palavras-chave

Vírus Zika, Ciclo de infecção viral, Células de inseto, C636, Sf9