Dados do Trabalho

Título

PADRONIZAÇÃO DO CULTIVO IN VITRO DA LINHAGEM CELULAR DE NEUROBLASTOMA HUMANO (IMR-32) PARA ISOLAMENTO DE ARBOVÍRUS ENCEFALITOGÊNICOS

Introdução

O cultivo de células teve sua origem com o isolamento de placa neural de embrião de galinha, com a finalidade de estudar seu desenvolvimento in vitro. As linhagens celulares apresentam diferentes fases de crescimento que permitem caracterizar parâmetros próprios da população celular sob diferentes condições de cultivo. Nesse sentido, é crucial a padronização do uso da linhagem celular IMR-32 para a elaboração de modelos experimentais efetivos.

Objetivo(s)

Estabelecer as condições de cultivo ideias para o manuseio da linhagem IMR-32 a fim de contribuir para o isolamento de arbovírus encefalitogênicos.

Material e Métodos

Foram realizadas cinco passagens de células IMR-32 em diferentes tipos de meio de cultura (MEM, DMEM e 199) suplementados com diferentes percentuais de Soro Bovino Fetal (SBF) em garrafas de cultura de 25cm2. A frequência de repique foi estabelecida quando as culturas atingiram 80 de confluência. Na tentativa de estabelecer a quantidade celular ideal para modelos experimentais foram testadas cinco concentrações diferentes (1x105, 1,5x105, 2x105, 2,5x105, 3x105) em placas de 24 orifícios com posterior avaliação da cinética celular da melhor concentração.

Resultados e Conclusão

A velocidade de multiplicação das células foi maior quando as culturas foram mantidas em estufa a 37º C sob atmosfera úmida de 95% de H2O e 5% de CO2 em meio DMEM. A quantidade de SBF que se mostrou melhor ao crescimento celular foi 10% e para a manutenção celular 5%. A aparência da monocamada celular era mais “saudável” quando as células foram cultivadas em MEM. Quando cultivadas em meio 199 as células apresentavam crescimento mais lento e aparência “sofrida”. Com relação à frequência de repiques, foi estabelecido que as culturas devem ser repicadas a cada 5 dias. A quantidade celular ótima estabelecida dentre as concentrações testadas em placas de 24 orifícios foi a de 1x105. A fase de maior atividade metabólica da célula tem início, aproximadamente, após 48h. Dentre os substratos usados o DMEM apresentou melhores resultados, logo é o melhor meio para o crescimento e manutenção das culturas de células IMR-32, nas condições testadas. A padronização das condições de cultivo da linhagem celular IMR-32 torna-se uma ferramenta importante para a elaboração de modelos experimentais efetivos, possibilitando verificar a susceptibilidade e a propagação das arboviroses neuroinvasivas, bem como averiguar a capacidade de produzir partículas virais em células nervosas.

Palavras-chave

Técnicas de Cultivo Celular; Neuroblastoma; Encefalite por Arbovirus.