Dados do Trabalho

Título

PAPEL DAS PLA2S ISOLADAS DA PEÇONHA DE Bothrops jararacussu SOBRE ATIVAÇÃO DO INFLAMASSOMA NLRP3 EM CÉLULAS MONONUCLEARES DO SANGUE PERIFÉRICO HUMANO.

Introdução

:As fosfolipases A2 (PLA2s) são proteínas abundantes na peçonha de serpentes do gênero Bothrops e possuem um papel importante na reação inflamatória e na ativação leucocitária principalmente por monócitos e linfócitos. O inflamassoma NLRP3 é um complexo multiproteico, presente nas células do sistema imune, ativado por estímulos como padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) e padrões moleculares associados à danos (DAMPs). A ação das PLA2s, frente às células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs) ainda não está bem elucidada.

Objetivo(s)

O presente estudo objetivou avaliar o papel das PLA2s (BthTX-I Lys49) ou (BthTX-II Asp49) do veneno da serpente Bothorps jararacussu sobre ativação do inflamassoma NLRP3 em células mononucleares do sangue periférico.

Material e Métodos

testes de viabilidade com 7AAD,a expressão gênica de NLRP3, Caspase-1, ASC, IL-1β e GAPDH , foi realizada por RT-qPCR (1h). Além disso, a expressão proteica de NLRP3, Caspase-1, ASC, da gasdermina D (GSDMD) e da β-actina, foi verificada por Western Blot, assim como liberação de IL-1β por EIA. A morte celular por piroptose foi verificada, por dosagem de LDH.

Resultados e Conclusão

Os resultados evidenciaram que nas concentrações de 5 e 10 μg/mL não houve morte celular. Os resultados mostraram expressão gênica relativa significativa quando comparada ao controle GAPDH dos genes para NLRP3, ASC, Caspase-1 e IL-6 em 1 hora e, de IL-1β, em 2 horas. A expressão proteica foi realizada após 4 horas de estímulo das PBMCs e os resultados obtidos mostram expressão das proteínas do complexo inflamassoma NLRP3 e da GSDMD. Em seguida, para verificar a morte celular dependente da ativação de caspase-1, piroptose, foi realizada a dosagem de LDH no sobrenadante das PBMCs após 4 e 6 horas. A liberação de LDH ocorreu em 6 horas, bem como a expressão de GSDMD, sugerindo que a liberação dessa molécula ocorre devido a formação de poros na membrana, consequência da piroptose. Tomados em conjunto, os dados obtidos mostram que as PLA2s, BthTX-I e BthTX-II, isoladas do veneno de Bothrops jararacussu, ativam o complexo do inflamassoma NLRP3 culminando com a formação de poros na membrana por ativação da GSDMD em PBMCS humano contribuindo para a resposta inflamatória observada nos envenenamentos por essa serpente.

Palavras-chave

Bothrops jararacussu, PLA2s, PBMCs, inflamassoma NLRP3.