Dados do Trabalho

Título

Dinâmica de ação das PLA2s Lys-49 e Asp-49 do veneno de Bothrops jararacussu na ativação do Inflamassoma NLRP3 em macrófagos murinos.

Introdução

As fosfolipases A2 (PLA2s) são proteínas encontradas em venenos de serpentes com ações hemolíticas, anticoagulantes, miotóxicas, edematogênicas, bactericidas e inflamatórias. No veneno da serpente Bothrops jararacussu, as PLA2s são encontradas em cerca de 30% do veneno. BthTX-I é uma Lys49-PLA2 e BthTX-II uma Asp49-PLA2 são PLA2s miotóxicas e inflamatórias deste veneno. Ambas as PLA2s podem ativar o inflamassoma NLRP3, uma plataforma intracitoplasmática que reconhece moléculas liberadas quando o tecido é lesado liberando IL-1β que contribui para a resposta inflamatória observada nos casos de envenenamento.

Objetivo(s)

O objetivo deste estudo foi verificar a dinâmica de ação de BthTX-I e BthTX-II em macrófagos murinos e mioblastos C2C12 e o envolvimento da ativação do inflamassoma PGE2 e NLRP3. Para isso, macrófagos e mioblastos C2C12 estimulados com BthTX-I e BthTX-II para verificar a ativação do inflamassoma NLRP3, envolvimento do receptor P2X7, receptor de prostaglandina tipo 2 (EP2) e tipo 4 (EP4) e a via da ciclooxigenase (COX).

Material e Métodos

foi avaliada por RTq-PCR, imunofluorescência indireta, Western blot na presença e ausência de antagonistas de receptores EP2 e EP4. Nos macrófagos elicitados e estimulados, as duas toxinas induziram a expressão gênica dos componentes do inflamassoma NLRP3, P2X7, as citocinas (IL-1β, IL-6 e IL18), COX-1 e COX-2, EP2 e EP4. Por outro lado, esses achados não foram observados em mioblastos C2C12. O tratamento de macrófagos com antagonistas para EP2 (EP4PF04418948) e EP4 (GW627368X) aboliu este efeito.

Resultados e Conclusão

As duas toxinas também induziram a expressão proteica dos componentes do inflamassoma NLRP3 e o tratamento com os antagonistas aboliu esse efeito. A ativação do inflamassoma NLRP3 foi confirmada por ensaio de imunofluorescência e pela quantificação de IL-1β liberada por macrófagos. Ao tratar os macrófagos com os antagonistas para EP2 (EP4PF04418948) e EP4 (GW627368X) foi possível confirmar a participação dos receptores de PGE2 neste efeito. Juntos, os dados obtidos mostram que o dano muscular causado pelo BthTX-I in vivo desencadeia a ativação do complexo inflamassoma NLRP3. In vitro, BthTX-I e BthTX-II podem ativar macrófagos e induzir a ativação do complexo inflamassoma NLRP3 com a participação da via COX e dos receptores para PGE2, contribuindo para o efeito deletério observado no envenenamento.

Palavras-chave

Palavras-chave: Fosfolipases. Inflamossoma NLRP3. Ciclooxigenases, Bothrops jararacussu