Dados do Trabalho

Título

RT-PCR MULTIPLEX PARA DETECÇÃO DE ROTAVÍRUS A, D, F e G EM AVES

Introdução

Os Rotavírus (RV) são considerados como importantes patógenos causadores de gastroenterite em seres humanos e animais jovens, dentre elas, as aves e os mamíferos. Os grupos de RV que infectam exclusivamente as aves são os RVA, RVD, RVF e RVG. No Brasil, os RV já foram detectados em aves de corte, aves domésticas e aves selvagens.

Objetivo(s)

Este estudo objetivou a padronização da técnica de RT-PCR Multiplex para detecção de Rotavírus A, D, F e G em aves

Material e Métodos

Suspensões fecais a 10% em tampão Tris-Ca++ 0,01M foram preparadas em 21 espécimes fecais de aves do banco de amostras do Instituto Evandro Chagas, seguida da extração do genoma viral. A RT-PCR Multiplex foi realizada utilizando iniciadores específicos para diferentes genes de RVA, RVD, RVF e RVG. A confirmação de positividade das amostras, bem como a validação da RT-PCR Multiplex, foi realizada por eletroforese em gel de agarose a 2%, seguida de purificação e sequenciamento dos amplicons pelo método de Sanger. Os primers foram avaliados quanto a sua especificidade e sensibilidade e a técnica de RT-PCR Multiplex foi avaliada quanto a sua reprodutibilidade, repetibilidade e o coeficiente de Kappa.

Resultados e Conclusão

Dessa forma, todos os primers foram específicos e com um limiar de detecção de 5x10-5 ng/µL. A técnica apresentou uma reprodutibilidade de 91,6%, repetibilidade de 93,54% e o coeficiente de Kappa igual a 0,82 que descreve uma força de coincidência quase perfeita. Dessa forma, o teste desenvolvido foi considerado uma ferramenta específica e sensível para a detecção simultânea dos diferentes grupos de RV que infectam aves.

Palavras-chave

Rotavírus aviários; Ensaio; Validação; RT-PCR Multiplex.