Dados do Trabalho

Título

PADRONIZAÇÃO DO USO DAS ENZIMAS DE RESTRIÇÃO HAE III E SDU I NA CARACTERIZAÇÃO DAS ESPÉCIES DE LEISHMANIA AGENTES DE LEISHMANIOSE TEGUMENTAR NA AMAZÔNIA BRASILEIRA POR HSP70PCR-RFLP

Introdução

Na Amazônia brasileira, a ocorrência da leishmaniose tegumentar americana (LTA) envolve uma diversidade de espécies de parasitos do gênero Leishmania. A identificação correta das espécies de Leishmania sp. é importante para estudos clínicos, epidemiológicos e terapêuticos. Com o avanço das técnicas de biologia molecular vários trabalhos têm demonstrado que a PCR-RFLP vem sendo usada para auxiliar no diagnóstico e identificação de espécies de Leishmania quando se utiliza enzimas de restrição.

Objetivo(s)

Utilizar uma abordagem diagnóstica combinada com o ensaio Hsp70 PCR-RFLP para identificar Leishmania spp. que atuam como potenciais agentes de LTA pertencentes aos subgêneros Viannia e Leishmania.

Material e Métodos

Foram selecionadas 10 cepas de referência do criobanco do Laboratório de Leishmanioses ‘Prof. Dr. Ralph Lainson’, todas associadas à LTA: 2/10 L. (L.) amazonensis - IFLA/BR/1967/PH8 e MHOM/BR/2009/M26361; 2/10 – L. (V.) braziliensis - MHOM/BR/1975/M2903 e MHOM/BR/1975/M2904; 2/10 – L. (V.) guyanensis - MHOM/BR/1975/M4147 e MHOM/BR/1997/M16342; 1/10 – L. (V.) lainsoni - MHOM/BR/1981/M6426; 1/10 – L. (V.) shawi - MCEB/BR/1984/M8408; 2/10 – L. (V.) lindenbergi - MHOM/BR/1996/M15729 e MHOM/BR/1996/M15732. As amostras de DNA foram amplificadas utilizando os iniciadores HSP70sen/HSP70-ant, em seguida os produtos de PCR foram submetidos a digestão enzimática usando as endonucleases HAE III e SDU I.

Resultados e Conclusão

Após a análise dos padrões eletroforéticos obtidos foi possível identificar: a) perfil da L. (V.) lainsoni distinto de todas as outras espécies pertencentes aos subgêneros Viannia e Leishmania; b) diferenciar L. (L.) lindenbergi e L. (V.) guyanensis; c) diferençiar L. (V.) braziliensis e L. (V.) utinguensis. A metodologia empregada permitiu caracterizar molecularmente espécies de Leishmania spp. causadoras da LTA na Amazônia Brasileira por Hsp70PCR-RFLP; a técnica empregada foi capaz de diferenciar os subgêneros Leishmania e Viannia; a técnica de Hsp70PCR-RFLP combinada neste estudo sugere a diferenciação de todas as espécies isoladas no Estado do Pará, contudo para confirmarmos nossos achados necessitaremos realizar o sequenciamento dos produtos amplificados.

Palavras-chave

Leishmaniose tegumentar americana, HSP70 PCR-RFLP, HAE III, SDU I.
Agência financiadora: Instituto Evandro Chagas-MS/CNPq