Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento de um sistema de screening rápido para prospecção de moléculas inibidoras de proteassomo em Leishmania amazonensis

Introdução

Tripanossomatídeos patogênicos representados principalmente pelos gêneros Leishmania e Trypanosoma são microrganismos responsáveis por causar doenças que afetam milhares de pessoas em todo mundo.Estas são classificadas como Doenças Tropicais Negligenciadas(DTNs) pela OMS e considerando a quantidade de pessoas impactadas,estimula-se produção de conhecimento científico sobre DNTs com o intuito de possibilitar o desenvolvimento de estratégias mais eficazes de prevenção e controle.O proteassomo é um complexo multicatalítico de proteases dependentes de ATP essencial na proteólise mediada pela ubiquitina e é considerado a principal via regulada de degradação de alvos proteicos em eucariotos.Pela participação na proliferação celular e diferenciação de patógenos,emergiu como alvo para tratamento de doenças causadas por parasitas.Compostos inibidores de proteassomo,como MG132 e lactacistina mostraram atividade em tripanossomatídeos.Recentemente,para monitoramento da ação desses inibidores em T. brucei foi produzida uma linhagem repórter baseada no acúmulo de GFP durante inibição do proteassomo,que possibilitou análise da inibição de forma simples e rápida.A geração de linhagens similares em Leishmania pode ser utilizada no desenvolvimento de protocolos para triagem de moléculas com potencial ação antiparasitária e monitoramento da eficiência do tratamento com inibidores de proteassomo.

Objetivo(s)

Assim,este estudo teve por objetivo obter uma linhagem repórter similar na espécie L. amazonensis.

Material e Métodos

Para isso,foi obtido um plasmídeo recombinante a fim de expressar a proteína fluorescente GFP fusionada à ubiquitina,utilizado na transfecção de células promastigotas de L. amazonensis,que após selecionadas,foram caracterizadas quanto a resposta ao tratamento com MG132 através da avaliação em microscópio de fluorescência.

Resultados e Conclusão

Ensaios preliminares mostraram que ao serem expostas ao inibidor MG132 na concentração inicial de 5µM/4h,foi possível identificar emissão de fluorescência em decorrência do acúmulo do GFP no citoplasma do parasita,indicando que o sistema de screening desenvolvido em L. amazonensis é responsivo a um inibidor comercial do proteassomo.Testes com outras concentrações e tempos de incubação serão realizados,bem como finalização da caracterização fenotípica da linhagem e o estabelecimento de um protocolo de screening rápido de inibidores inéditos pode se tornar uma ferramenta útil na busca por alternativas terapêuticas contra leishmanioses.

Palavras-chave

Tripanossomatídeos;proteassomo;GFP;MG132