Dados do Trabalho

Título

Efeitos da intoxicação por metilmercúrio no transcriptoma de células da linhagem neural humana SH-SY5Y

Introdução

O metilmercúrio (MeHg) é considerado o poluente orgânico mais tóxico dentre os compostos com mercúrio. A estrutura molecular o permite atravessar a barreira hematoencefálica, resultando em graves lesões ao Sistema Nervoso Central (SNC). Os principais efeitos da intoxicação pelo MeHg incluem deficiências sensoriais e motoras em adultos e comprometimentos no desenvolvimento neural em crianças em estágio gestacional.

Objetivo(s)

Contribuir para o entendimento das bases genéticas que culminam em alterações nas células do SNC, por meio da avaliação das alterações transcriptômicas em neuroesferas (cultivo 3D) da linhagem de células neurais SH-SY5Y, após exposição à dose tóxica de MeHg.

Material e Métodos

Inicialmente, para a determinação das concentrações tóxicas (CT), neuroesferas foram expostas a diferentes concentrações de MeHg (10-3-10µM) em distintos intervalos de tempo (24, 48 e 72h). Em seguida, a menor CT foi selecionada para o estudo transcriptômico, realizado com o uso da tecnologia de Microarray (Sureprint G3 Human GE v2.0, Agilent). Em uma última etapa, utilizando-se a ferramenta R e a biblioteca EGSEA, foi realizada a análise dos dados gerados para identificação dos principais mecanismos e genes celulares afetados. Foi aplicado Fold Change de 1,5 e valor de p≤ 0.05 como critérios de corte para genes diferencialmente expressos (GDE).

Resultados e Conclusão

Nos ensaios citotóxicos, a concentração de 2,5µM apresentou-se como a menor CT, com redução na viabilidade celular em 11,5 e 79,1% após 48h e 72h de exposição, respectivamente. Na análise transcriptômica, um total de 722 GDE foram identificados em, pelo menos, um dos períodos analisados. Genes associados com a proliferação e a morte, a adesão e a mobilidade, a comunicação, o desenvolvimento e o metabolismo celular, a resposta a estímulos e a regulação celular, dentre outros processos, foram observados nos três tempos analisados. Nossa análise sugere, ao menos, dois caminhos principais para a citotoxicidade do MeHg observada nas células neurais SH-SY5Y: (1) alterações na homeostase do cálcio, devido à mudança na expressão de genes que participam do processo de transporte do íons, a exemplo dos genes SCL3A2 e GRIN2A (encontrados superexpressos), ATP2C1 e SEC61A1 (subexpressos); (2) alteração na formação (ou reparação) de proteínas, envolvendo, principalmente, a atividade do retículo endoplasmático, em virtude de alterações em genes como DDIT3 (superexpresso) e P4HB (subexpresso).

Palavras-chave

Metilmercúrio (MeHg), Intoxicação, Células Neurais, Cultivo 3D, Transcriptoma.