Dados do Trabalho

Título

Avaliação da técnica Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) para diagnóstico da leishmaniose visceral canina em cães provenientes do município de Barra Mansa, Rio de Janeiro, Brasil.

Introdução

A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença zoonótica negligenciada, de difícil diagnóstico, causada por protozoários do gênero Leishmania. O ensaio de LAMP é um teste diagnóstico molecular, de baixa complexidade e tempo de execução quando
comparado à PCR convencional (cPCR).

Objetivo(s)

Avaliar os resultados da técnica LAMP em comparação com resultados de cPCR, com amostras de swab conjuntival, frente aos resultados dos testes parasitológicos de referência.

Material e Métodos

Este trabalho recebeu dispensa de CEUA visto que utiliza amostras biológicas oriundas de projetos anteriores já aprovados (LW19/20; 071/2015). Foram analisados 20 cães com sorologia reativa para LVC (TR DPP e ELISA). Foram coletadas amostras de swab conjuntival do olho esquerdo e direito, e para técnicas parasitológicas, foram realizados exame direto e cultura de medula óssea e/ou linfonodo poplíteo. O método de extração de DNA dos swabs foi com kit PureLink™ Genomic DNA e as amostras foram submetidas à cPCR kDNA (RV1/RV2) e LAMP k26 com mix WarmStart Colorimetric Lamp. Em cPCR, foi utilizado volume final de 25µl para a reação, sendo 5µl de DNA, e em LAMP, 12,5µl de volume final, sendo 2µl de DNA. Como controles para as reações, foram utilizados cepa de referência de L. infantum e cão sabidamente negativo e saudável. A sensibilidade analítica do LAMP k26 foi analisada através de diluição seriada de L.infantum até 1fg. Os resultados dos ensaios foram inseridos no banco de dados RedCap.

Resultados e Conclusão

Resultados: Dos 20 cães avaliados, 13 foram positivos em pelo menos um dos testes parasitológicos, e 7 foram negativos em ambos. A sensibilidade na cPCR foi de 92,31% e especificidade de 100% e em LAMP a sensibilidade foi de 53,85% e especificidade 100%. A sensibilidade analítica do LAMP k26 foi de 1pg. Conclusão: Dentre as técnicas moleculares, em comparação com as parasitológicas, a cPCR se mostrou mais sensível, indicando uma necessidade de ajustes nos protocolos de LAMP. Considerando a sensibilidade analítica encontrada para LAMP k26, ajustes na técnica poderão elevar seu desempenho. Por seus benefícios e o potencial de obter resultados
equivalentes aos da cPCR, o LAMP é promissor, valendo-se de aperfeiçoamento para sua realização.

Palavras-chave

Leishmaniose visceral canina; PCR convencional; LAMP; diagnóstico.