Dados do Trabalho

Título

Identificação do Trypanosoma cruzi e da Leishmania spp por NPCR (Nested PCR) e qPCR (PCR quantitativa) em candidatos a doação de sangue de São Paulo e Mato Grosso do Sul, Brasil

Introdução

A doença de Chagas (DC) e a leishmaniose são doenças negligenciadas. Indivíduos assintomáticos em processo de migração podem levar as infecções para áreas não endêmicas, permitindo a transmissão por meio de transfusões sanguíneas e doação de órgãos, nos locais onde não são realizados testes de triagem. No Brasil, a triagem sorológica para DC é obrigatória; para a leishmaniose não há recomendações atuais. Há uma porcentagem de sorologias inconclusivas da DC nos bancos de sangue e os testes sorológicos empregados podem apresentar reações cruzadas entre as doenças.

Objetivo(s)

Os objetivos desse estudo foram: realizar o levantamento epidemiológico e aplicar a técnicas moleculares e sorológicas para identificar a DC e/ou leishmanioses em candidatos à doação que apresentaram sorologia não negativa para o T. cruzi.

Material e Métodos

Foram avaliados 56 indivíduos, sendo 37 candidatos à doação de sangue com sorologia não negativa para a DC, 18 indivíduos com a DC e 11 indivíduos com sorologias negativas para DC e leishmanioses.

Resultados e Conclusão

Nos candidatos à doação de sangue (n=37), o ELISA para DC foi positivo em 25,7%, a NPCR amplificou em 34,3% e a qPCR foi positiva em 24,3%. A sensibilidade NPCR e qPCR foi de 44,4% e 22,2%, respectivamente. Um candidato apresentou IFI positiva para leishmaniose, sendo essa amostra também positiva para DC pela qPCR. No grupo dos portadores da DC (n=18), o ELISA apresentou 94,4% de resultados positivos, a NPCR foi positiva em 38,9% e a qPCR em 27,8%. A sensibilidade da NPCR e da qPCR foi de 35,3%. A padronização da qPCR apresentou eficiência de e=0,86 para T. cruzi e de e=0,83 para Leishmania spp, com temperaturas de dissociação de 81,86ºC ±0,45 e 81,28ºC ±0,58, nos testes de repetibilidade avaliados por sete dias. Aplicando ao menos um dos métodos diagnósticos descritos (NPCR, ELISA e qPCR), foi possível identificar o T. cruzi em 61,8% dos casos não negativos em candidatos a doação de sangue. Mesmo havendo significância estatística ao avaliar as diferenças entre as temperaturas de dissociação avaliados pela qPCR, não foi possível utilizar esse parâmetro para o diagnóstico diferencial entre a DC e leishmaniose, pois as temperaturas se sobrepõem. Esse trabalho reforça a necessidade da utilização de dois métodos para triagem sorológica da DC em bancos de sangue, além do uso de métodos moleculares nos casos em que os testes discordantes não são esclarecidos pela sorologia.

Palavras-chave

doença de Chagas, Leishmaniose, sorologia inconclusiva, NPCR, qPCR, doação de sangue.