Dados do Trabalho

Título

Cultivo e proliferação de cepas de Leishmania em diferentes sistemas em meio acelular bifásico.

Introdução

No diagnóstico laboratorial das Leishmanioses, especial destaque é dado para a identificação e caracterização etiológica dos agentes causais. A demonstração da presença do parasito pode ser obtida com a utilização de diferentes tipos de metodologias e técnicas laboratoriais, a partir de amostras coletadas dos indivíduos infectados. A proliferação e o isolamento de Leishmania em meios e sistemas de cultivo apresenta sensibilidade variável, dependente do tipo de cultivo, da qualidade da amostra coletada e do seu processamento e, tudo mais que se relaciona a tentativa de cultivo in vitro nas condições de laboratório.

Objetivo (s)

Neste estudo realizamos avaliações de diferentes sistemas para o isolamento e proliferação de diferentes cepas de Leishmania.

Material e Métodos

Meios acelulares bifásicos: 1. Fase sólida - BAB (blood agar base) acrescido de sangue desfibrinado de coelho, ou de carneiro ou de cavalo em tubos com tampa rosqueada, estéreis, nas dimensões de 16x160 mm, 18x180 mm, 20x200 mm e em microplacas de 96 poços, com tampa, estéreis, com capacidade de 300 µL por poço; 2. Fase líquida - Caldo BHI (brain heart infusion), acrescido de 300 µg/mL de gentamicina e 5% de urina humana estéril. O volume de cada meio distribuido nos tubos e nas microplacas variou em função das dimensões dos tubos e microplacas.
Cepas de Leishmania:1. L.(L.) infantum, L.(L.) amazonensis, L.(L.) major, L. (V.) braziliensis e uma quinta cepa isolada e preservada no acervo do Instituto Adolfo Lutz desde o final da década de 1930. Os experimentos foram realizados em triplicata.
Inóculos: Em função do sistema de cultivo, da capacidade dos tubos e da microplaca, foram ajustados para concentrações de 10e6, 10e4, 10e1 e 10e0 parasitos.

Resultados e Conclusão

Todos os sistemas utilizados possibilitaram a manutenção e proliferação das cepas de Leishmania incluídas neste estudo. L.(V.) braziliensis apresentou crescimento tardio, em tubos e microplacas entre 24 e 72 horas em relação às demais cepas. Independente do sistema, tubos ou microplacas e a concentração de formas promastigota contidas nos inóculos, L.(L.) infantum alcançou proliferação superior à 10e7 e 10e8 parasitos. Exceto para L.(V.) braziliensis, para todas as demais cepas os meios que incluíram sangue de cavalo na fase sólida revelaram proliferação mais intensa que a observada com sangue de coelho e carneiro. Para cultivos iniciados com menos de 10 parasitos por inóculo, foram observadas proliferações até 10e5 e até 10e7.

Palavras-chave

Leishmania, cultivo.

Agradecimentos

Fapesp - 17/50333-7 FESIMA - 19/0157