Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento, validação e implantação de ensaio de RT- qPCR multiplex para ampliação da vigilância laboratorial e epidemiológica nas infecções respiratórias virais em Minas Gerais.

Introdução

As infecções virais do trato respiratório são um problema persistente de saúde pública, sendo uma das causas mais comuns de infecção em todo o mundo. Nos países desenvolvidos, são responsáveis por aproximadamente 80% das infecções causadas por vírus, sendo a síndrome respiratória aguda a principal causa da hospitalização de bebês e crianças, além de ser considerada uma das principais causas de morte nos países em desenvolvimento. As infecções virais do trato respiratório estão entre as infecções mais comuns em crianças, podendo ocorrer várias vezes por ano em bebês e crianças pequenas, apresentando taxa de incidência com variação inversamente proporcional à idade. A gravidade pode variar de leve, com sintomas semelhantes a um resfriado comum, a uma infecção mais grave em indivíduos que apresentam alguma comorbidade crônica ou fatores de risco clínico.

Objetivo (s)

Desenvolver e implantar um painel de diagnóstico molecular para 15 vírus respiratórios, através da técnica de RT-qPCR multiplex,no LACEN-MG.

Material e Métodos

Foram selecionados primers desenhados pelo Centers for Disease Control and Prevention (CDC) para 15 diferentes vírus respiratórios e realizada análise inicial através da ferramenta Multiple Primer Analyzer da Thermo Fisher. Essa análise, forneceu as informações necessárias, como temperatura de melting, e as possíveis interações entre os oligonucleotídeos, com o objetivo de verificar as estruturas secundárias e dímeros que podem ser formados quando vários primers e sondas são adicionados em um mesmo poço de reação, permitindo uma avalição 'in silico" para estabelecer o melhor desenho para agrupamento dos alvos investigados no ensaio. Por fim, foram realizados testes para determinar as condições ideais para a reação e teste comparativo para verificar se ocorre perda de sensibilidade do ensaio multiplex em relação ao singleplex.

Resultados e Conclusão

Após análise in silico, o ensaio foi estabelecido, definido cinco agrupamentos contendo contendo 3 diferentes vírus respiratórios, sendo que no primeiro foi também inserido o controe endógeno RNAse P humana. Os testes mostraram que não houve diferença significativa entre o ensaio RT-qPCR multiplex em relação ao singlepex. A implantação do ensaio de RT-qPCR multiplex para o painel de vírus respiratórios, otimiza o processo de execução dos exames, proporciona uma economia de até quatro vezes dos insumos utilizados permitindo aumentar o número de amostras processadas em menor tempo.

Palavras-chave

RT-qPCR multiplex , vírus respiratórios,

Agradecimentos

Fundação Ezequiel Dias