Dados do Trabalho

Título

Avaliação da atividade inibitória da Crotapotina de Crotalus durissus terrificus contra Leishmania spp.

Introdução

O tratamento das leishmanioses tem apresentado dificuldades devido a toxicidade dos fármacos, variedade das respostas terapêuticas e resistência do parasito. A crotapotina da serpente Crotalus durissus terrificus pode apresentar-se como um potencial inibidor da ação do parasito, uma vez que outras frações do veneno desta serpente já foram anteriormente estudados e apresentaram atividade in vitro sobre estas células.

Objetivo (s)

O presente estudo visou avaliar o potencial inibitório in vitro da crotapotina (CA) contra leishmania amazonensis e in silico contra Tripanotiona redutase de Leishmania braziliensis (TRLb).

Material e Métodos

Parasitos da espécie L. amazonensis (cepa IFLA/BR/196/PH-8) foram cultivados em meio Schineider’s em diferentes faixas de pH e temperaturas, para transformação das formas promastigotas para amastigotas. A anfotericina B (AMB) foi o controle positivo [0,2 µg/mL]. Após incubação por 72 h em estufa a 32ºC foi realizado o ensaio de MTT (metil-tiazol) a 570 nm. As estruturas da Crotapotina foram baseadas no complexo crotoxina PDB 3R0L. Através do servidor online GRAMM (Global Range Molecular Maching), foram realizados experimentos de docagem molecular, utilizando a estrutura da TR (receptor) e a estrutura da CA (ligante). Foi utilizada a metodologia de “docking livre”. Os resultados foram avaliados sob as coordenadas em uma caixa d’água cúbica (10 Å de distância entre os átomos de proteína e a borda da caixa) utilizando os servidores CHARMM-GUI e o software GROMACS v.2021. Foram realizadas simulações de 1 ns de duração cada do tipo NVT e NPT (temperatura e pressão, respectivamente) seguidas de simulação sem restrições de 100 ns

Resultados e Conclusão

Os resultados in vitro mostram que 20 µg/mL da CA exibiu atividade inibitória de 41% no crescimento de formas amastigotas de L. amazonensis, comparada à AMB, que necessitou de 0,2 µg/mL para desempenhar a mesma ação. O teste ANOVA revelou um valor de P<0,0001, que indica uma diferença estatisticamente significativa entre os grupos testados, reforçando a eficácia da CA na inibição do crescimento das amastigotas. Na docagem e dinâmica molecular, a CA apresentou interação satisfatória com o sítio Z e sítio hidrofóbico da TRlb, com energias calculadas de -7,635 kcal e -7,620 kcal, estimando-se valores de Kd = 2,52 e Kd = 2,59, respectivamente. Foi possível observar que as interações entre as moléculas de CA e TR nos sítios escolhidos inicialmente, se mantiveram estáveis ao longo dos 100 ns da simulação.

Palavras-chave

Crotapotina, Leishmaiose, Inibição.

Agradecimentos

FAPERO