Dados do Trabalho

Título

Avaliação da aplicabilidade da técnica de PCR digital para diagnóstico molecular da hepatite C.

Introdução

A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) é uma das maiores causas de doença hepática crônica. Atualmente o diagnóstico molecular do HCV é feito por PCR em tempo real (RT-qPCR), porém este método pode ter menor sensibilidade em pacientes com baixa carga viral. O PCR digital baseado em gotas (ddPCR) pode ser uma alternativa ao diagnóstico, uma vez que foi desenvolvido com a promessa de ser uma metodologia mais sensível, além de apresentar a vantagem de não necessitar de curva de calibração para quantificação.

Objetivo (s)

Avaliar a aplicabilidade do ddPCR para detecção e quantificação da carga viral de HCV em amostras clínicas, comparando com o padrão-ouro RT-qPCR.

Material e Métodos

Foram avaliadas 47 amostras de soro provenientes do biorrepositório do Laboratório de Hepatites Virais, onde 39 amostras eram de casos de hepatite C e 8 amostras eram do grupo controle negativo. O RNA viral foi extraído utilizando kit comercial (QIAamp Viral RNA - QIAGEN) e posteriormente submetido a reações de ddPCR (QX200 Droplet Digital PCR – Biorad) e RT-qPCR (Abbott RealTime HCV). Para o ddPCR, foram avaliados dois métodos: Evagreen e sondas Taqman. Foram realizados cálculos de sensibilidade, especificidade e acurácia das metodologias de ddPCR testadas.

Resultados e Conclusão

A população de estudo compreendeu 31 mulheres e 16 homens, entre 20 e 82 anos de idade. A média de carga viral pelo qRT-PCR foi igual a 6,0 x 106 cópias/mL e pelo ddPCR Evagreen e TaqMan foi 6,42 x 108 cópias/mL e 5,5 x 105 cópias/mL, respectivamente. O ddPCR com Evagreen apresentou sensibilidade, especificidade e acurácia de 90%, 100% e 91%, respectivamente, e o ddPCR com sondas Taqman demonstrou sensibilidade, especificidade e acurácia de 82%, 100% e 85% respectivamente. Foi possível empregar o ddPCR para detecção e quantificação do HCV em amostras com boa eficiência, sendo que ambos os ensaios apresentaram 100% de especificidade. Este método pode ser promissor para o diagnóstico molecular do HCV.

Palavras-chave

hepatite C, diagnóstico, PCR digital.