Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL DA PROTEÍNA F1 RECOMBINANTE PARA O DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO MULTI-ESPÉCIE DA PESTE

Introdução

A peste é uma zoonose causada pela bactéria Yersinia pestis e transmitida por pulgas que infectam roedores e outros mamíferos, a qual tem sido associada a surtos em populações humanas ainda nos dias atuais. O ensaio de Hemaglutinação (HA) é amplamente utilizado no diagnóstico da peste, e tem como alvo a detecção anticorpos anti-F1. Visando melhorar os métodos de diagnósticos, nosso grupo de pesquisa desenvolveu previamente uma proteína F1 recombinante (F1-rec), que em ensaios de HA, funcionou de forma similar a F1 nativa obtida de Y. pestis.

Objetivo (s)

Dessa forma, o objetivo no presente trabalho é desenvolver e avaliar um ELISA multi-espécie utilizando o antígeno F1-rec de Y. pestis para verificar sua capacidade de detectar anticorpos anti-Caf1 em roedores, canídeos e humanos. Após a validação, temos o objetivo de tornar esta técnica o padrão ouro para diagnóstico sorológico da peste.

Material e Métodos

Considerando tais aspectos, a construção plasmidial pET21a-caf1 foi transformada em Escherichia coli linhagem BL21 e a proteína F1-rec foi expressa em fusão com uma cauda de histidinas na região C-terminal a 18°C na presença de IPTG. A proteína F1-rec foi purificada por cromatografia de afinidade utilizando resina HisTrap FF (Cytiva). A avaliação da imunorreatividade dessas proteínas foi realizada através de ELISA tendo como conjugado a proteína A (ELISA multi-espécie). Foram utilizadas neste ensaio: amostras de soro controle, soros anti-F1 de coelho imunizados com a proteína F1 ou com cepas inativadas de Y. pestis, previamente caracterizadas por HA, que foram fornecidas pelo Serviço Nacional de Referência em Peste.

Resultados e Conclusão

Os Resultados mostram que a proteína F1-Rec foi expressa no tamanho de 20 kDA como previsto e o rendimento obtido foi de 0,809mg/L. Em seguida, a proteína foi utilizada em ensaios de ELISA multi-espécie para determinação de sua capacidade de ser reconhecida pelas amostras sorológicas. De forma preliminar foi demonstrado que a proteína F1-Rec é reconhecida por anticorpos anti-Caf1 presentes nos soros positivos. Os próximos passos serão otimizar o ELISA multi-espécie com a proteína F1-rec para testarmos utilizando amostras positivas e negativas humanas e de animais para cálculo dos valores de sensibilidade e especificidade. Assim, demonstramos preliminarmente que a proteína F1-rec apresentou potencial para ser utilizada no ELISA multi-espécie e substituir a proteína Caf1 nativa no diagnóstico sorológico da peste.

Palavras-chave

ELISA; proteínas recombinantes; Yersinia pestis

Agradecimentos

CAPES