Dados do Trabalho

Título

Utilização de gradiente de densidade de Percoll como aprimoramento da etapa final de concentração do método Helmintex

Introdução

Em alguns países tropicais, como o Brasil, os programas de controle da esquistossomose têm levado a uma redução significativa na prevalência e na carga parasitária. Nesse cenário, o Kato-Katz (KK), como método diagnóstico de infecções tem limitação de sensibilidade. Como resultado, um número significativo de indivíduos infectados com baixa carga não é detectado. Helmintex (HTX) envolve várias etapas de concentração com o isolamento de ovos de S. mansoni a partir de 30 g de fezes, por meio de sua interação com esferas paramagnéticas em um campo magnético para detecção de ovos das fezes com sensibilidade três vezes maior que o método KK. Apesar de altamente sensível, execução do HTX consome muito tempo atrasando assim os resultados tornando-se necessário a avaliação de procedimentos que tornem mais rápida e eficaz essa metodologia.

Objetivo (s)

Objetivo: Buscar o aprimoramento do método HTX através da utilização de um gradiente de densidade utilizando Percoll.

Material e Métodos

Após a execução do método HTX foi aplicada a técnica descrita por Eberl e colaboradores em 2002. Em microtubo de 2ml foram adicionados 50µl de sedimento do Helmintex (amostra negativa) e semeado número conhecido de ovos de S. mansoni. Após foram acrescentados 150µL de solução salina 0,9%, 300 µL de Percoll, que resultou num gradiente Percoll 60% com volume final de 500 µL. A solução final foi agitada em vortex por 15 segundos e centrifugada por 15 minutos a 300 xg. Foram realizadas 6 repetições com quantidade diferentes de ovos semeados. Um total de 176 ovos de S. mansoni foram semeados. Posteriormente, cada amostra foi lida: cerca de 10 laminas de 50µl para cada amostra e os ovos contados ao microscópio óptico.

Resultados e Conclusão

Dos 176 ovos semeados nos 6 experimentos, apenas 10% foram detectados no sobrenadante. Dessa forma, 90% dos ovos de S. mansoni foram encontrados nos últimos 50µl, ou seja, na porção final do sedimento. Conclusão: Os resultados indicam que, apesar de inserir mais uma etapa ao procedimento HTX, o uso do gradiente de densidade de Percoll na etapa final do HTX favorece a sedimentação dos ovos e um resultado preliminar qualitativo rápido. De qualquer forma o sedimento todo precisa ser lido para garantir a validade de um resultado negativo, ou para estimativa adequada da carga parasitária.

Palavras-chave

Esquistossomose; coproparasitologia; Helmintex

Agradecimentos

FAPES-PPSUS: 09/2020, 2021-HGDKG; FAPES 15/2022 PROFIX, 1DNS6. CNPq PQ 1C 302675/2019-1