Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento da técnica de imuno-histoquímica, utilizando anticorpo monoclonal anti- subunidade β da proteina ligadora de guanina (AcMo anti-β-GBP) de Leishmania spp., para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar

Introdução

Devido às limitações das técnicas atualmente disponíveis para o diagnóstico da Leishmaniose cutânea (LC), aproximadamente 20% dos casos notificados no Brasil ainda são tratados sem confirmação laboratorial. Visando ampliar as estratégias disponíveis, nossa equipe vem trabalhando no desenvolvimento da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) utilizando anticorpos monoclonais (AcMo) para o diagnóstico da LC. Recentemente, desenvolvemos a técnica de IHQ utilizando AcMo anti-Tryparedoxina Peroxidase mitocondrial de Leishmania spp. (mTXNPx) que está sendo utilizada no Serviço de Imuno-Histoquímica do Instituto René Rachou (FIOCRUZ/MG) para o diagnóstico confirmatório da doença.

Objetivo (s)

Visando ampliar as opções de uso, o objetivo deste trabalho é desenvolver a técnica de IHQ utilizando AcMo anti-subunidade beta-like da proteína ligadora de guanina (β-GBP) de Leishmania spp., para o diagnóstico da LC.

Material e Métodos

Inicialmente, a sequência da β-GBP de L. braziliensis (A4HGX7_LEIBR) foi submetida à predição de epítopos e um minigene contendo três regiões antigênicas foi construído e inserido no plasmídeo pET28a. A proteína recombinante β-GBP foi produzida e utilizada como imunógeno em camundongos BALB/c, para produção de AcMo. A capacidade do AcMo anti-β-GBP reconhecer a proteína nativa foi avaliada por Western blotting utilizando extrato total de L. amazonensis, L. braziliensis e L. guyanensis. Em seguida, a aplicabilidade da IHQ utilizando AcMo anti-β-GBP, foi avaliada em cortes histológicos de pele de hamsters também infectados com estas espécies de Leishmania. A técnica de IHQ anti-β-GBP foi padronizada e está sendo validada em amostras de pacientes com suspeita de LC, atendidos no ambulatório da Policlínica Municipal de Teófilo Otoni, MG. Foi considerando como padrão de referência a PCR dirigida ao kDNA.

Resultados e Conclusão

Como resultados parciais do estudo de validação, a maior sensibilidade foi observada para IHQ anti-mTXNPx (63%), seguida por IHQ anti-β-GBP (59,3%), exame direto (53,7%), HE (42,6%). Especificidade acima de 95% foi observada para IHQ anti-β-GBP, exame direto e HE. A maior acurácia (77,9%) foi observada para IHQ anti-β-GBP, seguida do imprint (75%) e IHQ anti-mTXNPx (73,1%). A técnica de IHQ desenvolvida foi capaz de identificar as principais espécies de Leishmania causadoras de LC no Brasil e pode subsidiar estratégias diagnósticas para o controle dessa doença negligenciada.

Palavras-chave

Leishmaniose tegumentar; diagnóstico laboratorial; imuno-histoquímica; anticorpo monoclonal.

Agradecimentos

CNPq e FAPEMIG