Dados do Trabalho

Título

Estudo da diversidade genética da Proteína Rica em Histidina 2 (HRP2) de Plasmodium falciparum e sua influência no desempenho dos Testes Rápidos de Diagnóstico (RDT) de malária

Introdução

As proteínas PfHRP2 e PfHRP3 são expressas em níveis elevados no início do ciclo assexuado de Plasmodium falciparum, parasito causador da malária. Devido à alta concentração de PfHRP2, a maioria dos estudos são focados nessa proteína, assim como a maioria dos Testes Rápidos de Diagnóstico (RDTs) para a doença. Por outro lado, existem poucos estudos sobre HRP3, proteína que também pode ser detectada pelos RDTs devido a sua constituição semelhante à de HRP2. A partir de 2013, mais de 300 milhões de RDTs para malária passaram a ser distribuídos anualmente. Nos últimos anos, parasitos com deleção nos genes pfhrp2/3 foram documentados em diferentes países, inclusive no Brasil, alertando a Organização Mundial da Saúde (OMS) para a confiabilidade desses testes.

Objetivo (s)

O presente estudo tende a contribuir para um diagnóstico confiável da malária no Brasil, o qual é fundamental para garantir que os pacientes sejam tratados adequadamente no momento certo, reduzindo assim a morbidade e a mortalidade e auxiliando no controle da propagação da doença.

Material e Métodos

Aproximadamente 400 amostras de três municípios de Roraima foram coletadas e a infecção por P. falciparum foi confirmada por microscopia. Posteriormente, foi realizado o teste rápido que detecta HRP2/LDH dessa espécie e a amplificação dos genes pfhrp2/3 e de seus respectivos flanqueadores por NestedPCR, e também amplificação de pfhrp2 por qPCR. Uma parcela dos isolados que amplificou pfhrp2 foi sequenciada pelo método de Sanger com o objetivo de avaliar sua variabilidade genética.

Resultados e Conclusão

O diagnóstico utilizando RDT identificou uma positividade de 93% para HRP2 e 87% para LDH. Apenas 4% dos isolados não amplificaram para pfhrp2 na PCR, e desses, 1,6% também foram negativos nos testes rápidos. Para qPCR, apenas 2% dos isolados amplificaram esse gene. Para pfhrp3, a frequência de isolados que não amplificaram foi de 31%. Obtivemos 81 sequências de pfhrp2 de alta qualidade, nas quais foram observados 5 diferentes perfis de combinações de repetições de aminoácidos já descritos em estudos anteriores. Ao final do estudo espera-se fazer a relação entre a varibilidade e deleção de HRP2 com os resultados dos RDTs e contribuir com os dados coletados pela Organização Mundial da Saúde (OMS) no programa de avaliação dos testes que possuem essa proteína como principal antígeno.

Palavras-chave

Malária, Diagnóstico, Plasmodium falciparum, pfhrp2, Teste Rápido de Diagnóstico

Agradecimentos

Agradecimento especial ao Instituto René Rachou, colaboradores do projeto e agências de fomento.