Dados do Trabalho
Título
DESENVOLVIMENTO DE IMUNOENSAIOS ENZIMÁTICOS (ELISA) DE ALTO DESEMPENHO E BAIXO CUSTO PARA O DIAGNÓSTICO IN VITRO DA INFECÇÃO PELO VÍRUS SARS-COV-2
Introdução
Atualmente o diagnóstico laboratorial do SARS-CoV-2 baseia-se em ensaios moleculares. Todavia, estas técnicas apresentam redução da sensibilidade com o decorrer do tempo. Paradoxalmente, técnicas de diagnóstico indireto apresentam incremento progressivo da sensibilidade. Ademais, os ensaios de biologia molecular, como a RT-qPCR, apresentam elevadas taxas de resultados falso-negativos, requerem infraestrutura complexa e mão de obra especializada, além de apresentarem elevados custos de execução. Para endereçar estas questões, testes sorológicos indiretos podem ser empregados, sendo especialmente úteis nos casos em que não há detecção através das técnicas diretas, quando o paciente delonga a procura pela assistência médica e em regiões isoladas, sem a infraestrutura necessária para executar técnicas de biologia molecular.
Objetivo (s)
Desenvolver, avaliar e validar imunoensaios enzimáticos (ELISA) indiretos de alto desempenho e baixo custo para a detecção IgG anti-SARS-CoV-2 em amostras sorológicas, empregando os antígenos S1 e S2 recombinantes.
Material e Métodos
Os antígenos foram adquiridos da empresa Creative Diagnostics (Shirley-NY, EUA). As amostras usadas no estudo foram previamente caracterizadas utilizando três testes sorológicos comerciais. A padronização dos ensaios foi realizada através de checkerboard titration e a razão de sinal-para-ruído foi utilizada para determinação das condições ideais dos testes. Os resultados foram avaliados através de parâmetros de desempenho que caracterizam um teste diagnóstico.
Resultados e Conclusão
Foram utilizadas 354 amostras de pacientes hospitalizados, com resultados positivos em RT-qPCR para SARS-CoV-2, colhidas entre 0-73 dias após o início dos sintomas (147, 133, e 66 amostras colhidas na 1ª, 2ª e ≥3ª semana após o início dos sintomas), e 338 amostras negativas, obtidas antes do surgimento do SARS-CoV-2. O teste comercial GOLD ELISA COVID-19 IgG+IgM detectou imunoglobulinas em 57,6% (204/354) das amostras positivas, enquanto os testes Anti-SARS-CoV-2 NCP ELISA IgG e Anti-SARS-CoV-2 NCP ELISA IgM detectaram IgG e IgM em 41,6% (147/353) e 43,1% (155/353) das amostras, respectivamente. Os ELISAs S1 e S2 IgG detectaram imunoglobulinas em 52,4% (186/354) e 63,7% (225/323) das amostras, respectivamente. O ELISA S1 IgG apresentou sensibilidade similar aos dos testes comerciais, enquanto o ELISA S2 IgG apresentou desempenho superior, além de um custo inferior ao ELISA S1 IgG.
Palavras-chave
SARS-CoV-2, COVID-19, Imunodiagnóstico
Agradecimentos
CNPq, CAPES, FAPESB, Fiocruz-INOVA
Área
Eixo 02 | Tecnologia e Inovação em saúde
Categoria
NÃO desejo concorrer ao Prêmio Jovem Pesquisador
Autores
Leonardo Maia Leony, Larissa Carvalho Medrado Vasconcelos, Alan Oliveira Duarte, Ângelo Antônio Oliveira Silva, Aquiles Assunção Camelier, André Costa Meireles, André Luiz Feitas Oliveira Junior, Antônio Carlos Bandeira, Yasmin Santos Freitas Macedo, Isadora Cristina Siqueira, Fred Luciano Neves Santos