Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DA SENSIBILIDADE DE ISOLADOS DE Plasmodium vivax COLETADOS NA AMAZÔNIA BRASILEIRA A ANTIMALÁRICOS POR CITOMETRIA DE FLUXO

Introdução

Diante do surgimento da resistência do parasito aos antimaláricos, se tornou urgente a necessidade de desenvolvimento de estratégias para avaliar e validar a eficácia destes contra o parasito. Em vista disso, estudos demonstraram que a citometria de fluxo tem o potencial de proporcionar uma quantificação rápida e robusta do desenvolvimento do parasita ex vivo.

Objetivo (s)

Diante do exposto, esse projeto teve por objetivo avaliar a sensibilidade a antimaláricos de isolados de P. vivax da Amazônia brasileira, através da análise por microscopia óptica e citometria de fluxo.

Material e Métodos

Foram coletadas amostras de sangue de pacientes com malária vivax na Fundação de Medicina Tropical Heitor Vieira Dourado (FMT-HVD) Primariamente, leucócitos foram removidos através de coluna de celulose e gradiente de Percoll a 70% foi realizado em metade da amostra para enriquecimento da parasitemia. A suspensão de parasitas enriquecidos ou não (hematócrito 2% em meio IMDM 20% soro AB) foram adicionadas a placas de 96 poços impregnadas previamente com os antimaláricos selecionados e em diferentes concentrações, ou controle sem adição de drogas. O parasito foi incubado a 37 oC e em atmosfera hipóxica por aproximadamente 48h. A sensibilidade aos fármacos foi avaliada através da determinação da concentração inibitória em 50% (IC50) nos diferentes isolados (enriquecidos ou não) através da avaliação por microscopia óptica (MO; contagem de esquizontes em 200 parasitas assexuados em gota espessa) e citometria de fluxo (CF; determinação da porcentagem de parasitas maduros) através de simples e dupla marcação (SYBR; SYBR e Dihidroetídeo).

Resultados e Conclusão

A média da IC50 dos isolados enriquecidos, analisados por MO e CF dupla e simples marcados foram, respectivamente: Cloroquina - CQ (52,23; 65,48; 59,38), Mefloquina -MQ (80,23; 57,20; 29,89), Artesunato - ART (4,56; 2,49; 5,89), Atovaquona – ATV (14,97; 13,32; 2,05). Em amostras não enriquecidas: CQ (44,99; 7,89; 44,49), MQ (52,97; 61,93; 49,45), ART (2,09; 1,04; 8,44) e ATV (11,30; 10,20; 6,68). Os resultados demonstram que as duas técnicas de análise têm boa correlação, confirmando que a citometria é uma boa ferramenta para análise de sensibilidade de P. vivax aos fármacos. Ainda, os resultados em amostras enriquecidas sugerem que parece não haver prejuízo do parasito nos testes mesmo nesta condição.

Palavras-chave

malária; Plasmodium vivax; Sensibilidade ex vivo; Ensaio de maturação de esquizontes; Citometria de fluxo