Dados do Trabalho

Título

O miR-155a-5p ESTÁ CORRELACIONADO COM AUMENTO DE ROS E COMPROMETIMENTO DA APOPTOSE EM MACRÓFAGOS INFECTADOS POR Leishmania braziliensis

Introdução

A leishmaniose cutânea, causada pela L.braziliensis, é uma doença caracterizada por lesão ulcerada bem limitada com bordas elevadas em partes expostas do corpo. Os miRNAs são reconhecidos por seu papel na interação complexa e plástica entre hospedeiro e patógenos. O miR-155 é ativado pela sinalização dos TLRs e dados tem mostrado sua associação com apoptose e espécies reativas de oxigênio (ROS).

Objetivo (s)

Avaliar os efeitos da expressão de miR155a-5p em macrófagos humanos infectados com L. braziliensis

Material e Métodos

Culturas de macrófagos de voluntários saudáveis foram infectadas com promastigotas de L. braziliensis na proporção de 5:1, e macrófagos não infectados foram usados como controles. Para a expressão de miRNAs, avaliamos os tempos de 4, 12 e 24 horas de infecção. Avaliamos a expressão do miR-155 no RNA por qPCR, usando o kit miRCURY LNA SYBR (QIAGEN), seguindo as instruções do fabricante. A citometria de fluxo foi utilizada para acessar células apoptóticas/necróticas e determinar a expressão das espécies NOS e ROS. Após 48 horas, as células cultivadas foram marcadas com PE–anti-CD14 MAb (BD-Bioscience Pharmingen). Em seguida, adicionados anexina V FITC em tampão de ligação (BD-Bioscience Pharmingen). Para acessar as espécies intracelulares NOS e ROS, as células foram marcadas com diidrorodamina 123, DAF-FM diacetato (Life technologies), dihydroethidium (Life technologies) e CM-H2DCFDA (Thermo Fisher). As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo FACS (BD-Bioscience Pharmingen) e os dados foram analisados usando o programa FlowJo 7.6.5

Resultados e Conclusão

Observamos uma correlação inversa entre a expressão do miR-155a-5p e células positivas para anexina (AnV+) consistente nos três tempos de expressão analisados 4h (r= -0.8, p= 0.033), 12h ( r= -0.8, p= 0.034) and 24h ( r= -0.9, p= 0.016). Por outro lado, foi observada uma correlação positiva entre a expressão de ROS e do miR-155 também nos três tempos: 4h (r= 0.8, p= 0.058), 12h ( r= 0.8, p= 0.023) and 24h ( r= 0.8, p= 0.033). Em adição, a expressão inicial deste miR no pós-infecção foi positivamente associada com o número de células viáveis (não apoptóticas) na cultura em 48 horas. Conclusão: Identificamos um papel funcional do miR155a-5p na patogênese da leishmaniose cutânea, levantando a hipótese de que uma expressão aumentada de miR-155a-5p pelos ligantes TLR influenciam os mecanismos celulares estabelecidos para promover a morte e o controle do parasita após a infecção.

Palavras-chave

Leishmaniose, microRNAs, apoptose, ROS

Agradecimentos

INCT-DT e FAPESB