Dados do Trabalho

Título

ANÁLISE DA PRODUÇÃO BASAL DE ÓXIDO NÍTRICO POR LARVAS DE MOSQUITO Aedes aegypti POR DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DA HEMOLINFA

Introdução

O mosquito Aedes aegypti, possui grande importância por ser o principal vetor da dengue, zika e chikungunya. Possui a coloração preta com manchas e listras brancas características e as fêmeas são hematófagas obrigatórias. A hemolinfa dos mosquitos é composta por um plasma linfático e por células incolores suspensas, os hemócitos. Percorre quase todo o corpo do inseto e através dela ocorrem as trocas químicas, transporte de hormônios, enzimas e dos resíduos oriundos do metabolismo. O óxido nítrico (NO) é um gás incolor, moderadamente solúvel em água e sua meia-vida varia de 3 a 60 segundos, possuindo propriedades imunogênicas nas larvas de Ae. aegypti.

Objetivo (s)

Determinar a melhor técnica para coleta da hemolinfa de larvas do mosquito Ae.aegypti visando a dosagem de NO pelo método de Griess.

Material e Métodos

Para o estudo foram utilizadas larvas (L3) de Ae. aegypti proveniente da colônia cíclica do Laboratório de Biotecnologia Aplicada a Parasitas e Vetores da UFPB. As larvas foram divididas em três grupos de 20 e os experimentos foram realizados em triplicata. No grupo A as larvas foram decapitadas com uma lâmina de bisturi e a hemolinfa foi coletada com a utilização de uma micropipeta de 10 microlitros. Já no grupo B as larvas foram decapitadas com uma lâmina de bisturi e a hemolinfa foi coletada com o auxílio de um microcapilar de vidro, enquanto no grupo C as larvas foram maceradas inteira num gral e pistilo, e a hemolinfa coletada com auxílio de uma micropipeta de 10 microlitros. A hemolinfa foi coletada e acondicionada em tubos eppendorf contendo 200 μl de tampão PBS. Posteriormente foram centrifugadas durante 7 minutos, coletando-se o sobrenadante para dosagem do NO pelo método de Griess. Utilizou-se uma curva padrão de nitrito de sódio e a leitura foi realizada em espectrofotômetro a 540 nm.

Resultados e Conclusão

Como resultados, os grupos onde as larvas foram decapitadas e a hemolinfa coletada com a micropipeta obtiveram o melhor resultado quanto a capacidade de captação do NO da amostra (1,48 ppm), quando comparado aos grupos onde a hemolinfa foi coletada com o capilar de vidro (0,32 ppm) e com os grupos onde as larvas foram maceradas (0,75 ppm). A Diferença foi estatisticamente significativa. Conclusão: Os resultados mostram que o método que foi mais sensível para a dosagem de NO na hemolinfa de larvas de Ae. aegypti foi o método de decapitação da larva e coleta com auxílio da micropipeta.

Palavras-chave

Hemócitos, culicídeos, método de Griess

Agradecimentos

UFPB, LAPAVET, IDEP