Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento de vacinas micobacterianas atenuadas sem resistência a antimicrobiano como marca de seleção

Introdução

A Tuberculose humana (TB) é uma doença infecciosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), sendo considerada uma das 10 principais causas de morte em todo o mundo. A vacina BCG é a principal forma de profilaxia dessa doença. Entretanto, a capacidade protetora da BCG diminui na idade adulta. Por isso, o investimento em pesquisa e desenvolvimento de novas vacinas contra a TB é necessário, especialmente as sem marcas de seleção aos antimicrobianos, visto que a presença desses genes impossibilitam o seu uso em humanos. Uma estratégia para retirar genes de resistência é a inserção de regiões DIF flanqueando-os, a qual permite a excisão de forma natural pela micobactéria por meio da clivagem de recombinases endógenas. A CMX é uma proteína recombinante que combina três antígenos expressos durante a infecção por TB cuja capacidade de proteger contra tuberculose em vacinas recombinantes de Mycobacterium smegmatis (mc²) ou BCG com marca de seleção já foi demonstrada.

Objetivo (s)

Desenvolver vacinas vivas atenuadas baseadas em mc2 contendo a proteína CMX integrada ao genoma sem marca de resistência a antimicrobianos.

Material e Métodos

Plasmídeos integrativos contendo a sequência gênica da proteína CMX e do gene de resistência a apramicina (apraR) flanqueada por regiões DIF (DifA) foram construídos in silico e in vitro foram usados para transformar mc². Transformantes resistentes à apramicina foram cultivados sem a presença do antibiótico para perderem a resistência. Transformantes que reverteram para sensíveis à apramicina foram analisados por PCR do DNA cromossomal para confirmar a presença do gene CMX e ausência do apraR.

Resultados e Conclusão

Os perfis eletroforéticos das digestões enzimáticas e da PCR dos plasmídeos recombinantes confirmaram a construção. Colônias de mc² transformadas com os plasmídeos e resistentes a apramicina foram cultivadas em meio sem antibiótico por várias passagens e aqueles clones que perderam a resistência foram analisados por PCR de DNA genômico para confirmar a presença do gene CMX e ausência de apraR. As vacinas recombinantes foram construídas e confirmadas podendo ser analisadas em ensaios para verificar sua proteção contra a TB e estudos de ensaios clínicos humanos.

Palavras-chave

imunobiológicos; recombinante; regiões DIF; Mycobacterium smegmatis

Agradecimentos

Agradeço a equipe dos Laboratórios de Bacteriologia Molecular e de Imunopatologia das Doenças Infecciosas (IPTSP - UFG) e ao CNPq pelo apoio no desenvolvimento da pesquisa.