Dados do Trabalho


Título

BIOENSAIO IN VITRO DE INIBIÇÃO DE FORMAÇÃO DE OOCINETOS DE PLASMODIUM VIVAX: UMA ESTRATÉGIA PARA BUSCA DE COMPOSTOS BLOQUEADORES DE TRANSMISSÃO DA MALÁRIA

Objetivo (s)

O objetivo deste estudo foi padronizar o ensaio de inibição de oocinetos a partir de amostras de sangue de pacientes infectados por Plasmodium vivax.

Material e Métodos

O estudo foi realizado em colaboração com o Centro de Pesquisa em Medicina Tropical – CEPEM, localizado na região de Porto Velho Rondônia. Após a coleta das amostras infectadas com formas sexuadas de P. vivax, foi iniciado o processo de quantificação da gametocitemia por meio da coloração por Giemsa. Foram selecionadas 10 amostras com a parasitemia igual ou superior a 10 gametócitos em 200 leucócitos, após essa confirmação, foi iniciado o processo de lavagem das hemácias infectadas com meio RPMI-1640 incompleto por centrifugação para a retirada dos leucócitos. Finalizado os processos de lavagens, foi iniciado o processo de separação dos gametócitos utilizando o gradiente de purificação Histodenz na concentração de 55% diluído em PBS 1x (pH final 7,2) na proporção de 1:3 feito a partir de uma solução estoque [27.6% (w/v) Histodenz, 5,0 mM tris-HCl, 3,0 mM KCl, e 0,3 mM EDTA]. Em seguida, a amostra foi centrifugada uma vez a 1500 xg por 20 minutos sem freio. Finalizado esse processo, o pellet foi coletado da interface e esse foi lavado por duas vezes a 500 xg por 5 minutos. Feito isso, o hematócrito foi ajustado para 2% com o meio de oocinetos suplementado com 20% de soro humano. Os gametócitos purificados foram adicionados nos poços das placas na proporção de 1:10 de meio de oocinetos. Após esse processo, a placa foi incubada por 24 horas na temperatura de 21-24 ºC. A quantificação dos oocinetos foi determinada por meio da microscopia mediante a contagem de 100 campos.

Resultados e Conclusão

Os resultados demonstraram que a contagem média de oocinetos diferenciados foi de 1.762,58 ± 1.209,71. A partir dos resultados expressos, esse bioensaio pode nortear pesquisas para eleger novos compostos para o bloqueio da transmissão da malária a partir de cepas circulantes de P. vivax in vitro.

Palavras-chave

Bioprospecção, Oocinetos, Gametócitos, P. vivax.

Agradecimentos

Fundação Oswaldo Cruz Rondônia - Fiocruz, EpiAmO, Coordenação de Aperfeiçoamento Pessoal de Nível Superior – CAPES, Programa Fiocruz de Fomento à Inovação – N°01/2022.

Área

Eixo 06 | Protozooses

Categoria

NÃO desejo concorrer ao Prêmio Jovem Pesquisador

Autores

LEANDRO NASCIMENTO MARTINEZ, AMÁLIA FERREIRA DOS SANTOS, WELINGTON DA SILVA PAULA DO NASCIMENTO, MARCINETE LATORRE ALMEIDA, MINELLY AZEVEDO DA SILVA, MAISA DA SILVA ARAÚJO, DANIEL SOL SOL DE MEDEIROS, CAROLINA BIONI GARCIA TELES