Dados do Trabalho

Título

USO DA ATOVAQUONA IN VITRO SOBRE AS FORMAS DE OOCINETOS DE PLASMODIUM VIVAX

Objetivo (s)

O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade da Atovaquona em inibir as formas de oocinetos de Plasmodium vivax in vitro.

Material e Métodos

O estudo foi realizado com isolados de P. vivax de pacientes atendidos no ambulatório de referência em malária do Centro de Pesquisa em Medicina Tropical – CEPEM/SESAU, localizado na região de Porto Velho, Rondônia. Após a coleta das amostras infectadas com o P. vivax, foi iniciado o processo de quantificação da gametocitemia por meio da coloração por Giemsa e foram selecionadas 5 amostras com a parasitemia igual ou superior a 10 gametócitos em 200 leucócitos. Para a remoção dos leucócitos, foi iniciado o processo de lavagem das hemácias com meio RPMI-1640 incompleto por centrifugação. Finalizado os processos de lavagens, foi iniciado o processo de separação dos gametócitos utilizando o gradiente de purificação histodenz na concentração de 55% diluído em PBS 1x pH final 7,2 na proporção de 1:3 feito a partir de uma solução estoque [27.6% (w/v) Histodenz, 5,0 mM tris-HCl, 3,0 mM KCl, e 0,3 mM EDTA]. Em seguida, a amostra foi centrifugada uma vez a 1500 xg por 20 minutos sem freio. O pellet foi coletado da interface e foi lavado por duas vezes a 500 xg por 5 minutos. Feito isso, o hematócrito foi ajustado para 2% com o meio de oocinetos suplementado com 20% de soro humano. Assim, os gametócitos purificados foram adicionados nos poços das placas com a Atovaquona previamente diluída na concentração de 10 µM. Como controle sem tratamento foi utilizado o DMSO (≤ 0,5%). Após esse processo, a placa foi incubada por 24 horas na temperatura de 21-24 ºC. A determinação da inibição de oocinetos, foi avaliada por meio da microscopia mediante a contagem de 100 campos.

Resultados e Conclusão

Os resultados demonstraram que a média de inibição foi maior do que 94,3% na concentração testada, confirmando que a Atovaquona é um importante fármaco para ser usado como controle em testes antiplasmodiais bloqueadores com as formas de oocinetos de P. vivax. Importante ressaltar, que essa ação inibitória para as formas de oocinetos, era observada na literatura somente para os oocinetos de P. berghei em modelos murinos.

Palavras-chave

Oocinetos, Gametócitos, Atovaquona

Agradecimentos

Fundação Oswaldo Cruz Rondônia - Fiocruz, EpiAmO, Coordenação de Aperfeiçoamento Pessoal de Nível Superior – CAPES, Programa Fiocruz de Fomento à Inovação – N°01/2022.