Dados do Trabalho

Título

PESQUISA DE PLASMODIUM SP. EM BIOLOGIA MOLECULAR POR RT-PCR COMO FERRAMENTA DE AVALIAÇÃO DO DESEMPENHO DE REVISÃO DE LÂMINAS DE GOTA ESPESSA

Introdução

A malária é uma doença infecciosa febril aguda cujos agentes são protozoários transmitidos por vetores. É considerada um grave problema de saúde pública mundial. No Brasil, a região amazônica é endêmica para os casos da doença no país, onde se concentram cerca de 80% dos casos. O diagnóstico é realizado pelo método da gota espessa, considerado o “padrão ouro” para diagnóstico de hemoparasitos. O diagnóstico por biologia molecular permite maior precisão quanto à definição do parasito.

Objetivo (s)

Analisar o desempenho do exame RT-PCR em lâminas de gota espessa de casos suspeitos de malária em relação à gota espessa.

Material e Métodos

Foram avaliadas lâminas de gota espessa analisadas pelos microscopistas de casos suspeitos de malária no estado do Amazonas, e que foram encaminhados para controle de qualidade no LACEN-AM. A extração do DNA das amostras foi realizado a partir da raspagem com bisturi das amostras de sangue das lâminas de gota espessa, e depositado em tubo tipo eppendorff em água ultrapura e deixado em repouso a temperatura 2 a 8oC. Após duas horas, o precipitado do material biológico foi submetido a extração seguindo o protocolo do fabricante para a detecção do Plasmodium sp.

Resultados e Conclusão

Neste estudo preliminar foram analisadas vinte amostras de lâminas de gota espessa e foi detectada uma discordância nas amostras avaliadas de 15%, comparando-se o RT-PCR em relação a leitura ao microscópio. Em biologia molecular foram detectadas infecções mistas (P. vivax + P. falciparum) enquanto no controle de qualidade de microscopistas só visualizaram P. vivax. Não foi detectada divergência nos exames negativos nem quando foi diagnosticado uma espécie somente.
Por ser laboratório de revisão estadual, o LACEN-AM recebe 30% das lâminas positivas e 5% das negativas para avaliação de conformidade. As técnicas moleculares vêm sendo amplamente empregadas para diagnóstico de doenças infecciosas. O diagnóstico pelo método da RT-PCR permite uma maior precisão quanto a definição do parasito, bem como identificar e monitorar as espécies circulantes na região. Devido a maior sensibilidade, a biologia molecular pode detectar espécies que passam despercebidas ao olho humano, e pode ser usado para revisão de locais de baixa transmissão e áreas com várias espécies circulantes.

Palavras-chave

malária, PCR em tempo real, controle de qualidade.