Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento e avaliação de ELISA usando proteína A como conjugado para diagnóstico de Leishmaniose Visceral Canina

Introdução

A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose de grande importância epidemiológica cujo o número de casos em regiões urbanas vem aumentando ao longo dos anos. No Brasil, a doença é causada pela Leishmania infantum e é transmitida por insetos flebotomíneos. O principal reservatório doméstico é o cão, que influencia profundamente a manutenção do ciclo biológico do vetor transmissor. Devido à proximidade entre humanos e cães, o diagnóstico precoce desta doença negligenciada é de extrema importância para o bem-estar de ambos. O teste diagnóstico atualmente comercializado pelo serviço público é o EIE-LVC, que é realizado utilizando extrato de Leishmania major e tem como conjugado anti-imunoglobulina G (IgG) de cão, que confere sensibilidade e especificidade muito variáveis. Como alternativa, a proteína A derivada de Staphylococcus aureus possui afinidade pela porção Fc de IgGs de várias espécies, inclusive de cães, possibilitando seu uso como conjugado nos ELISA. Nesse cenário, é importante avaliar os possíveis benefícios da utilização da proteína A no que diz respeito a detecção da doença em cães.

Objetivo (s)

Portanto, este estudo tem como objetivo desenvolver e validar ELISAs para diagnóstico de LVC que utiliza proteína A como conjugado.

Material e Métodos

Para atingir o objetivo, utilizamos uma proteína recombinante (Q5), já descrita na literatura e fornecida pelos colaboradores do projeto, e também utilizamos extrado de L. major como antígenos. Um ensaio de comparação entre a proteína recombinante e o extrato de L. major foi realizado usando 118 amostras positivas e 73 amostras negativas confirmadas pelo teste rápido DPP-LVC (Dual-path Platform). O cálculo de sensibilidade e especificidade foram realizado pelo MedCalc.

Resultados e Conclusão

Resultados obtidos tanto com a proteína Q5 quanto com o extrato de Leishmania mostraram sensibilidade e especificidade promissores, onde a proteína Q5 apresentou sensibilidade de 98% (92% a 99%) e especificidade de 97% (90% a 99%). Já o extrato de L. major obteve resultado de sensibilidade superior, de 100% (94 a 100%) e especificade de 94% (83% a 98%). Como perspectivas futuras, prevê-se o escalonamento da produção de protótipos para que seja realizada uma validação multicêntrica dos kits e avaliação de ensaios em outros animais para diagnóstico da Leishmaniose Visceral em mamiferos.

Palavras-chave

LV, diagnosis, ELISA

Agradecimentos

¹ Laboratório de Tecnologia Diagnóstica, Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos); ² Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz/PE)