Dados do Trabalho

Título

Avaliação do uso de diferentes componentes hematológicos na detecção de Plasmodium Vivax por qPCR

Introdução

A gota espessa ainda permanece como teste de diagnóstico padrão para malária, mas as técnicas moleculares, como a qPCR vêm sendo amplamente utilizadas por permitirem uma análise mais sensível e específica. Contudo existem fatores que podem influenciar nas reações moleculares e que implicam na qualidade do diagnóstico, como inativação da enzima responsável pela amplificação, qualidade ou purificação do DNA extraído e o número de células presentes na amostra inicial de interesse.

Objetivo (s)

Avaliar as concentrações de DNA obtidas de diferentes componentes hematológicos e verificar a diferença no número de cópias de DNA detectado pela qPCR.

Material e Métodos

Trata-se de um estudo transversal analítico. Foram selecionadas amostras de sangue total (ST), plasma (PL) e soro (SO), provenientes em uma mesma punção venosa de pacientes diagnosticados com malária vivax por gota espessa e atendidos na Fundação de Medicina Tropical Dr Heitor Vieira Dourado (FMT-HVD). Foi realizada extração de DNA utilizando o PureLink™ Genomic DNA Mini Kit e em seguida verificado a concentração de gDNA em NonoDrop™ One. Foram realizados ensaios de qPCR em triplicata para quantificação do fragmento específico de Plasmodium vivax (Pv 18S rRNA) utilizando reagentes Taqman® no 7500 fast Real-Time PCR System® (Applied Biosystems®) seguindo as recomendações do fabricante.

Resultados e Conclusão

Foram analisadas amostras de 56 participantes, em ST, PL e SO totalizaram 168 amostras. Foram calculadas médias das concentrações de gDNA, sendo 43,9ng/µL para ST; 4,3ng/µL para SO e 6,6 ng/µL para PL. Na qPCR foram identificadas 34 amostras positivas no ST, 27 positivas em SO e 18 no PL. Foi feita média do número de copias por tipo de amostra, obtendo 3159,1 cópias/µL em ST; 1,7 cópias/µL em SO e 61,9 cópias/µL para PL. Confirma-se que a performance da qPCR é superior nas amostras de ST, obtendo maior concentração do DNA de interesse, mais amostras detectadas como positivas e maior número de copias; podendo ser justificada pela presença dos parasitos em maior proporção no interior das hemácias que circulando livres após processo de centrifugação.

Palavras-chave

Pvs18, malária, qPCR

Agradecimentos

Agradecimentos a Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas (FAPEAM) pela concessão da bolsa de iniciação cientifica que possibilitou e execução do projeto e à equipe executora.