Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento de solução completa de diagnóstico point-of-care (extração de DNA + qPCR) para detecção de resistência ao antibiótico isoniazida, utilizado no tratamento da tuberculose

Introdução

Causada pelo patógeno Mycobacterium tuberculosis, a tuberculose é uma doença de alto impacto agravante, sendo uma das prioridades para a OMS em investimentos em pesquisa e erradicação. Embora existam antibióticos eficazes contra o bacilo, várias situações de resistência a eles já foram relatadas. Acredita-se que polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nos genes inhA e katG são responsáveis pelo surgimento da resistência dos bacilos à isoniazida, uma das principais drogas contra a doença. A técnica padrão-ouro para identificação de cepas resistentes é a cultura, mas o resultado desse teste pode demorar até 10 semanas. Testes moleculares como a qPCR são mais rápidos, mas requerem infraestrutura adequada para execução.

Objetivo (s)

Como alternativa para detectar a doença no menor tempo possível, e considerando o cenário de resistência e início do processo de isolamento após o contágio, este trabalho visa otimizar uma plataforma completa para uso no ponto de atendimento ao paciente, composta por um protocolo simplificado de extração de DNA, um equipamento portátil de qPCR, além de reagentes de qPCR otimizados para detectar DNA de M. tuberculosis e as mutações mais prevalentes na ocorrência de resistência a isoniazida.

Material e Métodos

DNA sintéticos dupla fita e DNA genômico extraído de M. tuberculosis inativadas foram utilizados para otimização da qPCR no instrumento portátil (Q3-Plus). Amostras de escarro pré-caracterizadas foram usadas para avaliar essa otimização. Estas amostras foram avaliadas quanto à presença das mutações mais comuns relacionadas à isoniazida (mutação C/T no gene inhA, e as mutações G/C e G/A no gene KatG), tanto após a extração de DNA a partir de kit comercial quanto após a extração pelo método simplificado baseado em cartão FTA.

Resultados e Conclusão

Os resultados mostram que a detecção das mutações no Q3-Plus alcançou limites de detecção clinicamente relevantes quando comparados aos testes de cultura e ao teste molecular em equipamento de bancada, atingindo valores de LOD95% de 3,98 copias/uL para a mutação C/T em inhA e de 6,38 copias/uL para a mutação G/C em katG. Esses resultados são promissores para a validação de um teste molecular completo e portátil para detecção de resistência ao antibiótico isoniazida em M. tuberculosis, sugerindo a possibilidade de detecção precoce e, por consequência, melhor direcionamento do tratamento, mesmo em ambientes remotos ou com pouca infraestrutura.

Palavras-chave

Diagnóstico point of care; resistência a antibióticos; tuberculose.

Agradecimentos

FIOCRUZ; ULBRA; IBMP; CNPq; CAPES.