Dados do Trabalho

Título

DELEÇÕES NO GENE HRP2 EM PLASMODIUM FALCIPARUM: UMA ANÁLISE COMPARATIVA DE PROTOCOLOS DE qPCR USANDO AMOSTRAS CLÍNICAS DE UMA REGIÃO ENDEMICA BRASILEIRA

Introdução

A malária é uma parasitose presente em áreas tropicais, sendo o Plasmodium falciparum a espécie mais letal. Além da microscopia ótica usada na rotina, testes rápidos (TRs) baseados na detecção da proteína HRP2 são usados em áreas remotas ou de difícil acesso. Entretanto, a eficiência dos TR tem diminuído devido a deleções em diferentes regiões do gene HRP2. Tais mudanças afetam o diagnóstico da doença e, por consequência, seu controle e monitoramento, representando uma ameaça aos esforços para a erradicação. Nestas condições, o uso extensivo de TRs pode levar a resultados falso-negativos, criando pressão para triagem seletiva de cepas negativas para esse gene.

Objetivo (s)

Avaliar a eficiência de diferentes protocolos de qPCR na detecção das deleções do gene HRP2 em amostras clínicas de pacientes infectados com Plasmodium falciparum provenientes de uma área endêmica do Brasil. Os resultados podem contribuir para a avaliação e melhoria da eficiência dos TRs baseados na detecção da proteína HRP2, contribuindo para o efetivo controle da malária.

Material e Métodos

Foram analisadas 62 amostras positivas para P. falciparum obtidas de pacientes em Porto Velho - RO. O DNA foi extraído de sangue total e analisado por qPCR utilizando três protocolos para amplificar o fragmento alvo HRP2: P1 (Grignard et al., 2020), P2 (Kreidenweiss et al., 2019) e P3 (Schindler et al., 2019). A eficiência foi avaliada através de curva padrão produzida com um controle sintético de DNA dupla fita. Além disso, foi avaliado a capacidade de detecção de deleções no gene HRP2 usando DNA extraído das cepas 3D7 (HRP2 +) e DD2 (HRP2 -).

Resultados e Conclusão

Usando DNA sintético, obtivemos eficiência de amplificação para o alvo HRP2 de 77,0%, 100,8% e 101,9% para P1, P2, e P3, respectivamente. Das 62 amostras analisadas, 56 foram positivas para o gene HRP2 nos três protocolos, indicando a ausência de deleções. P1 e P3 detectaram deleções em 5 amostras, P3 detectou deleção em uma sexta amostra, enquanto P2 não detectou deleção em nenhuma amostra. Os protocolos avaliados detectaram o alvo na cepa 3D7 e não detectaram na cepa DD2, como esperado. Os protocolos analisados possuem resultados ligeiramente discordantes, provavelmente por amplificarem regiões próximas embora diferentes, sugerindo que a escolha do protocolo de qPCR pode afetar o mapeamento de deleções no gene HRP2. A confirmação de tais resultados por sequenciamento é o próximo passo, sendo fundamental para a correta interpretação deles.

Palavras-chave

Plasmodium falciparum; HRP2; deleção; qPCR.

Agradecimentos

CAPES, CNPq