Dados do Trabalho

Título

Avaliação do papel autofágico na replicação do vírus Zika em linhagem celular SH-SY5Y

Introdução

O vírus Zika (ZIKV) é um arbovírus reemergente que constitui um problema de saúde pública. No entanto, atualmente, não há vacina ou tratamento aprovados. Um processo fundamental envolvido na infecção pelo ZIKV é a autofagia, uma via celular catabólica, que leva carga citoplasmática ao lisossomo para degradação, considerada uma forma primordial de imunidade inata contra microrganismos invasores. Evidências indicam que ZIKV inibe a via de sinalização Akt-mTOR, a qual causa ativação aberrante da autofagia, promovendo a replicação e propagação viral. Assim, é essencial estudar o papel do processo de autofagia na replicação viral do ZIKV, para identificação de potenciais alvos terapêuticos.

Objetivo (s)

Este trabalho avaliou o papel da autofagia na replicação do ZIKV.

Material e Métodos

A cepa ZIKV PE243 foi expandida na linhagem celular VERO CCL-81. Células SH-SY5Y foram submetidas a um estimulante [Rapamicina (80nM)] e dois inibidores [Cloroquina (50μM) e SBI-0206965 (10μM)] do processo autofágico: um inespecífico e um específico, respectivamente, e analisadas em 0, 24 e 48 horas pós-infecção (MOI=0,1). A carga viral foi mensurada utilizando o kit SuperScript III One-Step RT-PCR System com Platinum Taq DNA. As células foram marcadas com anticorpos primários anti-LC3B e anti-P62, moléculas de início e fim do processo autofágico, respectivamente. Em seguida, foram analisadas por citometria de fluxo. A comparação quantitativa foi realizada por meio da ANOVA em Two-Way de forma não-normal de múltiplas variáveis e assumindo significância de p<0,05.

Resultados e Conclusão

Observamos que células tratadas com cloroquina, um inibidor inespecífico da autofagia, demonstraram diminuição na carga viral (p=0.04 em tempo e p=0.01 para marcador celular LC3). Nossos dados reforçam resultados previamente descritos na literatura sobre a inibição da replicação viral pela cloroquina, uma vez que a mesma atua aumentando o pH interno endossomal, diminuindo a liberação de partículas virais infectantes no citoplasma da célula hospedeira, impedindo por fim a replicação viral. Os grupos tratados com SBI e Rapamicina nas concentrações utilizadas não demonstraram influenciar na replicação viral. Mais estudos utilizando diferentes concentrações dessas drogas devem ser realizados para esclarecer o papel da autofagia na replicação do ZIKV.

Palavras-chave

Morte Celular; LC3; P62; Macroautofagia

Agradecimentos

CAPES, CNPq e Ministério da Saúde