Dados do Trabalho

Título

Alterações na expressão e localização da Cx43 na cardiomiopatia chagásica crônica

Introdução

A cardiomiopatia chagásica crônica (CCC) é uma das manifestações clínicas doença de Chagas (DC), caracterizada por elevada morbi-mortalidade. As arritmias cardíacas são a principal causa de morte súbita nesses pacientes, podendo estar associada com alterações na proteína Cx43.

Objetivo (s)

Analisar a expressão e localização da Cx43 em modelo animal e em corações de pacientes com CCC, e no modelo de microambiente inflamatório in vitro.

Material e Métodos

Camundongos C57BL/6 com 6 e 12 meses de infecção com a cepa Colombiana do T. cruzi e controles não-infectados foram submetidos à avaliação funcional (ergometria e ECG), eutanasiados e os corações coletados para análises histopatológicas, imunofluorescência (anti-Cx43T; Cx43S368, Cx43S325/328/330 e N-caderina), Immunogold e RT-qPCR da Cx43 e citocinas. Amostras de corações explantados de pacientes com CCC (n=3) foram analisadas por imunofluorescência, assim como os cardiomiócitos da linhagem H9c2 e cardiomiócitos derivados de iPSC (CM-iPSC), que foram estimuladas com citocinas pró-inflamatórias (TNF, IL-1β e IFN-γ; 10 ng/ml/48h), simulando o microambiente inflamatório da CCC.

Resultados e Conclusão

Camundongos com CCC apresentaram diferentes graus de arritmias como o BAV ou TVP, e pior desempenho físico em relação ao controle em ambos os tempos de infecção (6 e 12 meses). Observamos intenso infiltrado inflamatório multifocal e fibrose, com significativo aumento da expressão gênica das citocinas nos corações. Através da imunofluorescência observamos a predominância da Cx43T nos discos intercalares no grupo não-infectado, enquanto no grupo CCC foi observado a presença da Cx43T nas membranas laterais e citoplasma dos cardiomiócitos, o que também foi observado para as formas fosforiladas Cx43S368 e Cx43S325/328/330. A marcação de Cx43T e N-cad e do Immunogold confirmou a Cx43 fora dos discos intercalares no grupo CCC. Nos corações humanos observamos resultados semelhantes, com prevalência da Cx43 fora dos discos intercalares. Adicionalmente, in vitro, observamos o microambiente inflamatório induziu dispersão da Cx43 pelo citoplasma, enquanto os CM-iPSC apresentaram redução significativa no tempo de condução do potencial de ação quando comparados ao controle. A expressão e distribuição da Cx43T e fosforiladas estão alteradas na CCC, o que pode contribuir para o estabelecimento de distúrbios de condução elétrica e ocorrência de arritmias.

Palavras-chave

Doença de Chagas, T.cruzi, cardiomiopatia, Cx43, Arritmia

Agradecimentos

Equipe LETI/ITS; Pronex; Capes; CNPq