Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DO ANTÍGENO RECOMBINANTE QUIMÉRICO IBMP-8.4 PARA DETECÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-Trypanosoma cruzi EM HUMANOS ATRAVÉS DO ELISA SANDUÍCHE DUPLO-ANTÍGENO

Introdução

O diagnóstico laboratorial da doença de Chagas (DC) depende da fase da doença. Na fase crônica, o diagnóstico é baseado em testes sorológicos, como o ELISA indireto. Contudo, apresenta limitações por utilizar anticorpos secundários IgG anti-humanos marcados com peroxidase, tornando a técnica classe e espécie-específica. O uso do ELISA sanduíche duplo-antígeno (DAgS-ELISA) pode ser uma alternativa para suprir esta limitação, pois utiliza o próprio antígeno marcado com a peroxidase como agente de detecção. Assim, um único teste diagnóstico pode ser empregado para identificar a DC independentemente da fase da doença e origem do soro.

Objetivo (s)

Avaliar e validar o desempenho diagnóstico do antígeno recombinante quimérico do T. cruzi IBMP-8.4 através DAgS-ELISA para a detecção da DC crônica humana.

Material e Métodos

O antígeno IBMP-8.4 foi conjugado à peroxidase através do método químico da hidrazona. A otimização dos ensaios de ELISA foi feita através da técnica de checkerboard titration. Até o momento, 588 amostras foram consideradas elegíveis para o estudo, sendo 287 positivas e 301 negativas para a DC. Todas as amostras foram previamente caracterizadas através do ELISA indireto e quimiluminescência. As melhores condições para o ensaio foram selecionadas através dos maiores valores da razão de sinal ruído (SNR). Para avaliação do desempenho diagnóstico, diferentes valores de ponto de corte do ELISA foram avaliados. Os parâmetros de desempenho avaliados foram sensibilidade, especificidade, acurácia, área abaixo da curva ROC (AUC) e o índice Kappa de Cohen (κ).

Resultados e Conclusão

O maior valor de SNR foi encontrado utilizando 12,5 ng de antígeno por poço, diluição sérica de 1:2 em e diluição do antígeno conjugado de 1:32.000. Na análise do desempenho, o valor de ponto de corte na qual o ensaio apresentou os melhores valores de sensibilidade e especificidade foi utilizando a média dos controles negativos acrescida à três desvios-padrão. Assim, a sensibilidade do ensaio foi de 99,3%, a especificidade de 94,4%, a acurácia de 96,7%, a AUC de 99,1% e o κ de 0,93, representando uma concordância quase perfeita com o padrão-ouro. De acordo com os parâmetros de desempenho avaliados, o antígeno IBMP-8.4 apresenta elevada capacidade diagnóstica para detecção de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi em humanos através do DAgS-ELISA. Estudos com a espécie canina serão realizados futuramente.

Palavras-chave

Trypanosoma cruzi, Imunodiagnóstico, ELISA, diagnóstico sorológico

Agradecimentos

CAPES, CNPq, Fiocruz-INOVA, FAPESB