Dados do Trabalho

Título

Isolamento in vitro de Leishmania infantum em meio de cultura enriquecido com sangue de equino

Introdução

O cultivo in vitro de parasito exerce um papel fundamental no estudo e tratamento de várias doenças. Os meios de cultivo mais utilizados para isolamento de Leishmania spp. são enriquecidos com sangue de coelho, por apresentar grande quantidade de nutrientes e suplementação proteica fundamentais para o crescimento e manutenção do parasito. A aquisição de sangue de coelho é um processo complicado, e a eutanásia é inevitável. O estudo propôs substituir o sangue de coelho por sangue de equino, como forma alternativa no cultivo de parasito.

Objetivo (s)

O objetivo do estudo foi isolamento in vitro de Leishmania infantum (L. infantum) em cultura, utilizando meios de ágar base enriquecido com sangue desfibrinado de equino (SDE).

Material e Métodos

Foram utilizadas amostras de aspirado de linfonodo e fragmentos de baço, fígado e linfonodo, de cão infectado com a doença. Os meios de culturas empregados para o isolamento do parasito foram o Agar Sangue Base (BAB) e Neal Novy Nicolle (NNN), ambos enriquecidos com 15% de SDE, que após solidificação adicionou-se caldo BHI. O utilizou-se o Meio 199 (M199) suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB). As amostras foram semeadas em duplicata, utilizando os protocolos: (NNN+SDE), (BAB+SDE) e (M199+SFB), mantidas em estufa por demanda bioquímica de oxigênio à 25ºC por 15 dias. Após isolamento primário, as amostras foram seriadas e diluídas com concentração final de 1x106 parasitos/ml, para avaliação da curva de crescimento.

Resultados e Conclusão

O estudo demonstrou que nos tubos contendo meios bifásicos NNN e BAB enriquecido com SDE, o crescimento primário de parasito foi de 72 horas, enquanto para os tubos suplementados com SFB foi de 96 horas. Em relação a curva de crescimento observou-se que durante a fase exponencial, as amostras contendo fragmentos de baço, fígado e linfonodo enriquecidos SDE obtiveram maiores concentrações de promastigotas, quando comparado às amostras suplementadas com SFB, sendo 189x106 e 128x106 parasitos/mL, respectivamente. A técnica tradicional de isolamento do parasita em meio de cultura mais comumente utilizado é em agar base enriquecido com sangue de coelho, no entanto, dificuldades operacionais na aquisição deste enriquecedor tem impulsionado a busca por outras fontes de suplementação proteica, para cultivo de L. infantum. O estudo revela que a utilização de SDE, como meio enriquecedor alternativo de cultivo para o isolamento primário de L. infantum foi viável para ser usado em rotina laboratorial.

Palavras-chave

Equino, Cultura, Leishmania infantum, Sangue